EBV感染在潮汕贲门癌变组织中的作用研究

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目的:  贲门癌是广东潮汕地区的高发恶性肿瘤之一,其发病机制并未阐明,很可能是有别于食管鳞状细胞癌和胃远端腺癌,应作为一种独立的疾病对其进行病因及发病机制的深入研究。肿瘤的发生发展是一个复杂的过程,是多种基因发生损伤、突变等不稳定现象后累积或叠加的综合结果。相关的研究提示,部分微生物(包括病毒)的持续感染会造成宿主基因组发生损伤、突变等,这与机体相应部位恶性肿瘤的发生发展的相关性极高。12%-15%的恶性肿瘤都是由各种致癌病毒的感染引起的,致癌病毒可以诱导细胞的基因组发生不稳定的变化,阻止细胞的自然凋亡,激活各种与肿瘤发生发展相关的信号通路以及促进炎症发生的信号通路等等。其中与肿瘤相关性较高的有 EB病毒,人乳头瘤病毒和巨细胞病毒,他们在多种肿瘤中都有一定的感染率,并且在肿瘤的发生过程中都起着重要的作用。因此,探究病毒在贲门癌中的感染情况以及在贲门癌变过程中的作用具有重要意义。EB病毒,人乳头瘤病毒和巨细胞病毒在其他肿瘤中已被广泛研究,而在贲门癌中研究尚少,本研究通过对贲门癌组织中 EB病毒、人乳头瘤病毒和巨细胞病毒的感染情况以及EB病毒的EBNA-1和EBER在贲门癌变过程中的表达进行研究,进一步探究和发现病毒在贲门癌中的作用和贲门癌的早期分子诊断标记。  方法:  ⑴收集2013.03-2017.03之间来自汕头大学医学院附属医院的外科手术切除标本147例贲门癌的原发病灶、配对的癌旁组织和远端正常组织。并收集2016.05-2017.03之间来自潮州市人民医院内镜室的非贲门癌患者的内镜取材标本96例。⑵将组织处理后进行HE染色,观察组织形态做出病理诊断。⑶提取新鲜组织DNA,采用巢式PCR检测病毒感染情况。⑷对PCR产物为阳性的进行sanger测序验证。⑸将新鲜组织DNA采用Q-PCR进行EB病毒LMP-1的定量分析。⑹采用二步法检测贲门石蜡组织中 EBNA-1、CD3、CD4、CD20等指标的表达。⑺检测贲门石蜡组织中EBER的表达情况。⑻采用OLYMPUS显微镜对切片的染色结果进行采图分析。⑼采用SPSS16.0统计软件对数据进行分析统计,采用卡方检验、Mann-Whitney U检验、Spearman相关分析。P值<0.05表示具有统计学意义。  结果:  ①EBV、HPV、HCMV在贲门癌患者中的感染率(63.27%,40.14%,27.89%)高于非癌患者(27.08%,8.33%,0%);HPV在癌旁组织中的感染率明显高于癌组织和正常组织(p<0.05),HCMV则在癌组织中较高;EBV在同一患者的癌旁组织中的拷贝数显著高于癌组织(p<0.01)。②EBV、HCMV的感染率与慢性炎症显著相关,随着炎症级别的升高,感染率也有所上升(rs=0.156,p<0.01;rs=0.159,p<0.01)。③EBNA-1在上皮内瘤变组织中的表达高于癌组织和正常组织(p<0.05),在上皮内瘤变、正常和癌组织中呈递减的趋势;而EBER主要在淋巴细胞中表达。④经免疫组化标记,感染 EBNA-1并且进入腺体中的淋巴细胞主要以 T淋巴细胞为主,但CD4、CD8为阴性。  结论:  ⑴潮汕地区贲门癌患者组织中EBV、HPV、HCMV的感染率均高于该地区非癌患者;EBV、HPV在癌旁组织中拷贝数或者感染率远高于癌组织,HCMV感染率在癌组织中较高;EBV和HCMV的感染率随着炎症级别的升高而增加。⑵EBNA-1在上皮内瘤变中的高表达,提示EB病毒在贲门癌变中可能起着重要的作用;感染EBV的T淋巴细胞进入腺体中,提示EB病毒和T淋巴细胞可能在贲门癌变中起着相辅相成的作用。
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