R-Ras属于Ras家族小分子量G蛋白,与Ras具有55%的氨基酸序列相似性,R-Ras和Ras家族的其他成员一样,结合GTP时处于激活状态,并通过其下游效应物,将胞外信号转导到胞内,调节细胞的生物学功能。C3G为Rap1的特异性的鸟苷酸交换因子,近年的研究表明C3G能与R-Ras相互作用。本研究的前期工作也表明全长的C3G能与R-Ras相互作用,而C端催化结构域与R-Ras相互作用较弱。为了进一步研究R-Ras与C3G的相互作用极其两者相互作用的生物学意义,首先检测了R-Ras与C3G缺失C末端催化结构域的缺失突变体C3GdelC的体外相互作用,通过在HEK293中瞬时转染C3GdelC,收获其蛋白并将其与外源表达GST-R-Ras进行GST-pull down及Western blot,结果表明R-Ras与C3GdelC在体外是相互作用的。同时将R-Ras与C3GdelC共转染HEK293细胞,通过免疫共沉淀及Western blot检测出在细胞内R-Ras与C3GdelC也是相互作用的。接着通过Overlay的方法,研究了R-Ras与C3GdelC相互作用的作用方式,将转移到PVDF膜上的细胞内表达的C3GdelC与外源表达的GST-R-Ras蛋白共孵育,Western blot的结果表明,GST-R-Ras能与膜结合的C3GdelC相互作用,R-Ras与C3G的相互作用是直接的。最后通过GST-pull down及Western blot的方法,找到了R-Ras与C3G相互作用的最小结构域为第210-406氨基酸残基。为了研究R-Ras与C3GdelC相互作用的生物学意义,首先将R-Ras与C3GdelC共表达于NIH3T3细胞中,通过细胞免疫荧光实验研究两者在细胞中的定位。结果发现C3GdelC主要分布在细胞质中,少部分在细胞膜上也有分布,而R-Ras主要分布在细胞质、细胞膜,二者主要共定位于胞质和部分质膜区附近。其次通过GST-RBD-pull down实验对R-Ras进行活性化分析,结果表明C3GdelC能促进R-Ras的活化。最后通过MTT比色实验研究了R-Ras与C3GdelC的相互作用对细胞黏附能力的影响。综上,R-Ras与C3GdelC的相互作用及生物学意义的研究对深入理解C3G-R-Ras信号转导途径具有重要意义。