目的1. 从新生大鼠海马中分离培养并鉴定神经干细胞,为神经干细胞的体外移植作 准备。2. 制作血管性痴呆大鼠动物模型,为研究血管性痴呆的发病机理和防治建立基 础。3. 探讨神经干细胞在血管性痴呆大鼠侧脑室的存活、迁移和分化,从而为神经 干细胞的体内存活、迁移和分化机理研究和临床应用提供实验依据。方法1. 利用无血清培养和单细胞克隆技术从新生大鼠海马分离具有单细胞克隆能力的细胞群并连续传代培养,获得大量细胞,采用免疫荧光细胞化学技术检测巢蛋白(Nestin)和分化后特异性成熟神经细胞抗原表达。2. 采用永久性结扎大鼠双侧颈总动脉法(2-VO)建立血管性痴呆大鼠动物模型,结扎后30 天,用Morris 水迷宫定位航行试验和空间探索试验来检测大鼠的学习记忆能力变化,并在光镜下观察大鼠海马组织结构的变化。3. 采用脑立体定位技术将5-溴-2’-脱氧尿苷( BrdU)标记的神经干细胞移植入血管性痴呆大鼠侧脑室内,饲养4 周后取脑,应用免疫荧光化学技术检测移植后细胞的存活、迁移和分化。结果1. 从新生大鼠海马分离得到的细胞经无血清培养后,具有连续传代能力,能表 达巢蛋白Nestin,经诱导分化后能表达神经元、神经胶质细胞的特异性抗原, 说明大鼠海马内存在神经干细胞。