【摘 要】
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目的:探究BRMS1L作为转录因子在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达情况,从细胞水平阐明BRMS1L在非小细胞肺癌中的重要作用;深入探讨其调节通路下游关键分子GPX2,明确BRMS1L调控GPX2介导谷胱甘肽代谢失衡,诱导细胞氧化应激损伤,从而抑制NSCLC进展的具体分子机制,为NSCLC临床新精准治疗模式提供新思路、新方法。方法:生物信息学分析预测转录因子BRMS1L对非小细胞肺癌生长、转移和患者
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目的:探究BRMS1L作为转录因子在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达情况,从细胞水平阐明BRMS1L在非小细胞肺癌中的重要作用;深入探讨其调节通路下游关键分子GPX2,明确BRMS1L调控GPX2介导谷胱甘肽代谢失衡,诱导细胞氧化应激损伤,从而抑制NSCLC进展的具体分子机制,为NSCLC临床新精准治疗模式提供新思路、新方法。方法:生物信息学分析预测转录因子BRMS1L对非小细胞肺癌生长、转移和患者预后的影响。非小细胞肺癌细胞株慢病毒转染,结合平板克隆及Transwell等实验技术,验证BRMS1L在非小细胞肺癌发生发展中的作用。利用RNA-Seq技术筛选过表达BRMS1L前后A549细胞mRNA差异表达谱,应用GSEA等聚类分析软件预测相关信号通路与关键调控蛋白GPX2。应用分子生物学手段,结合质粒转染技术检测GPX2转染前后的稳定过表达BRMS1L的肺癌细胞,生物学表型（克隆增殖、迁移、侵袭）的改变,以及通过流式细胞术检测细胞内的ROS水平。最后,通过CHIP实验明确BRMS1L直接调控GPX2的作用关系。结果:（1）Km plot数据库分析显示高表达BRMS1L的非小细胞肺癌患者有更长的生存期;TCGA数据库分析结果显示BRMS1L表达水平与非小细胞肺癌肿瘤大小呈现负相关（P＜0.001）;Oncomine数据库分析结果显示BRMS1L在转移的非小细胞肺癌中表达更低（P＜0.05）。经逆转录病毒过表达BRMS1L后,A549细胞克隆生长能力受到明显抑制,培养5天细胞增殖能力下降。肺癌细胞迁移及侵袭实验结果显示:同对照组相比,过表达BRMS1L后穿过transwell小室的细胞数量显著减少（P＜0.001）。（2）RNA-Seq技术结合基因簇富集分析（Gene set enrichment analysis,GSEA）发现过表达BRMS1L后,GPX2表达水平变化显著（差异表达约100倍）（P＜0.001）,与之相关的谷胱甘肽代谢信号通路也显著改变。之后,TCGA、Km plot数据库分析显示GPX2在非小细胞肺癌中存在mRNA表达上调现象,GPX2表达水平与非小细胞肺癌患者总生存期呈负相关。对稳定过表达BRMS1L细胞株进行瞬时转染过表达GPX2,从细胞水平上探究GPX2在对非小细胞肺癌发生发展中的作用。结果显示:GPX2可以增强非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。稳定过表达BRMS1L的表型特征因共转染得到一定程度的逆转。（3）qRT-PCR、Western blot检测过表达BRMS1L的肺癌细胞A549中GPX2的表达情况:发现过表达BRMS1L的A549细胞中GPX2水平显著下调（P＜0.001）。CHIP实验探究BRMS1L与GPX2的作用关系,流式细胞术检测BRMS1L能否导致ROS升高。结果显示:BRMS1L可以直接作用于GPX2的启动子影响GPX2表达（P＜0.001）,通过拮抗GPX2导致细胞内ROS水平升高,使用ROS清除剂NAC可逆转BRMS1L抑制肿瘤进展的效果。结论:（1）非小细胞肺癌组织中BRMS1L表达水平与非小细胞肺癌的病理分级及淋巴结转移有关,说明非小细胞肺癌组织中BRMS1L的表达水平可以反映非小细胞肺癌的进展程度并对其进行预后评估。（2）转录因子BRMS1L可以抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭过程,提示BRMS1L可以抑制非小细胞肺癌细胞的发生发展,为临床治疗提供新的靶点。（3）BRMS1L作为转录因子可以直接作用于GPX2的启动子,调控GPX2介导谷胱甘肽代谢失衡,使细胞内ROS水平升高,导细胞氧化应激损伤,从而抑制NSCLC进展。
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