肝癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,手术切除和肝脏移植是治疗肝癌最主要的方法,但手术切除的突出问题是术后复发率高。近年来的研究表明,手术操作和应激可促进肿瘤细胞的生长和侵袭性,围术期影响患者术后肿瘤的复发和长期预后的相关因素。因此,麻醉医师在恶性肿瘤围术期应使用具有抑制肿瘤细胞生长和侵袭性的麻醉药物或方法,最大限度地避免肿瘤细胞在围术期间的扩散或转移,以改善恶性肿瘤患者的转归。异丙酚(propofol,2,6-二异丙基苯酚)主要用于诱导、维持麻醉和镇静。近年研究发现,除麻醉效应外,异丙酚还存在其他效应,包括抗癌作用、器官保护作用、免疫调节作用、控制癫痫持续状态等。其中抗癌作用是异丙酚近年引人关注的方面。异丙酚对人外周血淋巴细胞功能无明显抑制作用,并不会抑制NK细胞的活性,相反通过不同的机制产生保护作用,包括抑制环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的产生,是一种不损害细胞免疫功能的静脉麻醉药。异丙酚能提高T细胞分化为Thl细胞,由于细胞毒性T淋巴细胞被认为是抗肿瘤免疫中最重要的形式,应用异丙酚有利于抗肿瘤免疫。有关异丙酚对癌细胞生长影响的研究不多,而且结果不一致,不同浓度的异丙酚对不同的癌细胞的影响不同。肝癌手术常采用全身麻醉,异丙酚是麻醉期间常用药物。我们关注异丙酚于围术期对肝癌细胞的影响,是否抑制肝癌细胞的增殖、凋亡和转移?是否减少肝癌的复发?因此设计此课题以求结果并探讨其机制。肿瘤细胞的生长是极其复杂的过程,包括增殖、凋亡、侵袭和转移等过程。Fas是一种重要的死亡受体,当与其配体FasL结合后可以形成”凋亡酶体”,从而依次激活Caspase-6、Caspase-7,最终活化Caspase-3进而诱导细胞凋亡。Bcl-2家族是对细胞凋亡具有广泛调控作用的一个基因家族。其中,Bcl-2是最主要的细胞凋亡抑制基因,Bax是最主要的细胞凋亡促进基因。肿瘤细胞的黏附和侵袭是肿瘤发生转移的重要步骤,抑制肿瘤的黏附和侵袭可以控制或降低肿瘤转移的发生。要控制肿瘤的转移,首先必须抑制肿瘤细胞与基质或基底膜或宿主细胞的黏附及对基质或基底膜的降解以及自身的运动。纤维粘连蛋白(FN)为基底膜及细胞外基质的重要成分,肿瘤细胞从母体脱离后,侵袭基底膜及细胞外基质,通过膜表面受体可黏附于FN上而产生运动与迁移,使肿瘤扩散与转移。基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)是肿瘤细胞生成的降解基底膜、细胞外基质的重要酶类。大量研究表明,MMPs在肿瘤转移中的核心作用是通过降解基底膜,促进肿瘤的侵袭和转移。其中最重要的是MMP2、MMP9, MMPs活性增加,会加速细胞外基质的降解作用,从而促进肿瘤细胞的浸润和转移。目前大量研究表明,MMP2与肝癌侵袭转移的关系甚为密切。PGE2是花生四烯酸经过COX-2催化的代谢产物,研究证实PGE2与肿瘤的关系密切,可以促进肿瘤细胞的增殖、侵袭转移,肿瘤的侵袭转移过程中涉及到细胞间基质和基底膜组成的细胞外基质的降解。PGE2可引起磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)增加。研究发现PI3K在肿瘤发生、发展过程中起到了重要作用。PI3K可进一步激活AKT(protein-serine-threonine kinase,蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶)和PDK1(phosphatidylinositol-dependent kinasel),从而启动一系列与细胞凋亡、细胞周期调控、端粒酶活性、血管生成、细胞迁移相关的程序。AKT对于调控细胞的生长、增值、存活以及糖代谢都有十分重要的作用。研究发现PI3K-AKT信号通路与乳腺癌、卵巢癌、肝癌等多种人类肿瘤发生相关。在PI3K-AKT信号通路中,PI3K-AKT的激活是关键条件,而使用PI3K-AKT特异性抑制剂LY294002能特异的阻滞PI3K-AKT的磷酸化过程,进而阻碍通路的激活,从而导致其下游事件减少,导致细胞的增殖减少,凋亡增加。增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antgen,PCNA)是比较公认的反映细胞增殖状态的重要指标。细胞静止状态时PCNA含量很少,当细胞的增殖活性升高,PCNA表达增强,PCNA增殖指数升高,反之则PCNA表达减弱,PCNA增殖指数降低。CD34原为造血干细胞抗原,后证实可在正常及新生的血管内皮细胞中表达,为目前最敏感的血管标记物。CD34已成为临床上常用的血管新生(angiogenesis)指标,用以检测微血管密度。临床使用异丙酚浓度对肝癌的生长影响如何?不同浓度对肝癌细胞的影响有何差别?目前尚无有关报道。本研究拟从细胞和动物研究两个层次观察不同浓度异丙酚对肝癌HepG2细胞株的增殖、凋亡及侵袭性的影响,研究PI3K-AKT信号通路在异丙酚对HepG2细胞株影响中的作用,还观察异丙酚对SMMC-7721细胞小鼠移植瘤的抑制效应。为手术治疗的肝癌患者选择适当的麻醉药物提供参考。第一章异丙酚对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响目的观察不同浓度异丙酚对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨有关分子机制。方法人肝癌HepG2细胞接种于培养板,培养24 h后,采用随机数字表法,将人肝癌HepG2细胞随机分为5组,每组n=6：正常对照组(C组)、脂肪乳组(Ⅰ组)、30μg/ml异丙酚组(P1组)、60μg/ml异丙酚组(Pz组)和120 μg/ml异丙酚组(P3组),P1-3组分别加入30、60、120μg/ml异丙酚,Ⅰ组加入10%脂肪乳,C组不接受异丙酚处理。5组处理结束后,继续培养。于不同时点,采用MTS(四唑类化合物)法、流式细胞仪、Annexin V-FITC/PI双染法、TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)+4,6-二脒-2-苯基吲哚(4’6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)双染法分别检测各组HepG2细胞处理后的增殖率、凋亡率及细胞周期。RT-PCR、Wester Blot法检测各组HepG2细胞处理24 h的Fas,Bax,Bcl-2mRNA及蛋白表达水平。统计学处理采用SPSS13.0统计学软件进行分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示。增殖率比较采用两因素方差分析,单独效应分析采用单因素方差分析,组间多重比较较采用LSD法(方差齐)或Dunnett’s T3法(方差不齐)。细胞凋亡率、细胞周期(部分运用Kruskal-Wallis Test法)、Fas、Bcl-2、Bax基因及蛋白表达的组间比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD法(方差齐)或Dunnett’s T3法(方差不齐)。P<0.05为差异有统计学意义。结果1.各组HepG2细胞增殖率的比较 经分析发现,异丙酚不同处理浓度各组间增殖率的差异有统计学意义(F=8781.441,P=0.000)。各个处理时间的P2、P3组增殖率均低于P1组(P<0.05),其中P2组增殖率>P3组增殖率(P<0.05)；异丙酚不同处理时间各组间增殖率的差异有统计学意义(F=5786.893,P=0.000)。异丙酚处理浓度与异丙酚处理时间这两个因素有交互效应(F=433.681,P=0.000)。P1、P2、P3组处理72h的增殖率>处理48 h的增殖率>处理24 h的增殖率(P<0.05)。I、P1、P2、P3组处理72h的增殖率>处理48 h的增殖率>处理24 h的增殖率(P<0.05)；与C组比较,P1、P2、P3组各个处理时间的HepG2细胞增殖率降低,Ⅰ组各个处理时间的HepG2细胞增殖率升高(P=0.41)。2.各组HepG2细胞凋亡率的比较TNUEL法检测结果：光镜下见HepG2细胞凋亡细胞明显固缩,核致密,深染为棕黄色、多叶状或新月状颗粒,常集聚在核周边；非凋亡细胞的核呈蓝色。C组有少许细胞核被深染为棕黄色的凋亡细胞,在P1、P2、P3组及Ⅰ组凋亡细胞无明显增加。经分析发现,对照组及异丙酚处理浓度各组间TNUEL法检测凋亡率的差异无统计学意义(F=1.316,P=0.291).Annexin V-FITC/PI双染法检测结果：各组HepG2细胞主要出现晚期凋亡。经分析发现,对照组及异丙酚处理浓度各组间Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡率的差异无统计学意义(F=1.617,P=0.201)。3.各组HepG2细胞周期的比较细胞周期图显示,各组细胞在G1、G2/M、S期的分布比例无明显变化。与C组比较,Ⅰ组、P1、P2及P3组细胞在G1、G2/M.S期的分布比例无统计学差异(其检验统计值分别为F=8.123,P=0.087; F=0.720,P=0.552；F=14.107,P=0.092)。4.各组HepG2细胞Fas、Bcl-2、Bax mRNA表达的比较与C组比较,P1～3组Fas、Bcl-2、Bax mRNA相对表达上调(P<0.05),Ⅰ组Fas、Bcl-Bax mRNA相对表达差异无统计学意义(分别为P=0.551；P=1.000;P=-0.448)；与P1组比较,P2～3组Fas、Bcl-2、Bax mRNA表达上调(P<0.05)；与P2组比较,P3组Fas、Bcl-2、Bax mRNA表达上调(分别为P=0.000;P=0.000；P=-0.000)；各组Bax/Bcl-2 mRNA比值组间比较差异无统计学意义(F=1.856,P=0.150)。5.各组HepG2细胞Fas、Bcl-2、Bax蛋白表达的比较 与C组比较,P1-3组Fas、Bcl-2、Bax蛋白相对表达上调(P<0.05),Ⅰ组Fas、Bcl-2、Bax蛋白相对表达差异无统计学意义(分别为p=0.700；P=1.000；P=0.562)；与P1组比较,P2-3组Fas、Bcl-2、Bax蛋白表达上调(P<0.05)；与P2组比较,P3组Fas、Bcl-2、Bax蛋白表达上调(P=0.000；P=0.000;P=0.000)；各组Bax/Bcl-2蛋白比值组间比较差异无统计学意义(F=0.089,P=0.984)。结论本研究条件下,30-120μg/ml的异丙酚抑制HepG2细胞的增殖,可能与上调Fas有关,与Bcl-2、Bax蛋白表达无关；异丙酚对HepG2细胞的凋亡及细胞周期无影响。第二章异丙酚对肝癌HepG2细胞侵袭性及转移力的影响目的 观察不同浓度异丙酚对人肝癌HepG2细胞侵袭性及转移力的影响,并探讨有关分子机制。方法人肝癌HepG2细胞接种于培养板,培养24 h后,采用随机数字表法,将人肝癌HepG2细胞随机分为5组,每组n=6：正常对照组(C组)、脂肪乳组(Ⅰ组)、30μg/ml异丙酚组(P1组)、60μg/ml异丙酚组(P2组)和120 μg/ml异丙酚组(P3组),P1-3组分别加入30、60、120μg/ml异丙酚,Ⅰ组加入10%脂肪乳,C组不接受异丙酚处理。5组处理结束后,继续培养。于不同时点,采用MTS法检测细胞粘附率,细胞划痕实验检测细胞迁移,Transwell法检测细胞侵袭。RT-PCR、Wester Blot法检测各组HepG2细胞处理24 h的MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达水平。统计学处理采用SPSS13.0统计学软件进行分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,细胞粘附率、侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达比较采用单因素方差分析,细胞迁移率采用两因素方差分析,单独效应分析采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD法(方差齐)或Dunnett’s T3法(方差不齐)。P<0.05为差异有统计学意义。结果1.各组HepG2细胞粘附率的比较五组间粘附率存在统计学差异(F=2834.276,P=0.000)。与C组比较,P1～3组HepG2细胞粘附率下降(P<0.05),Ⅰ组HepG2细胞粘附率上升(P=0.000)；与P1组比较,P2-3组HepG2细胞粘附率下降(P<0.05)；与P2组比较,P3组HepG2细胞粘附率下降(P=0.000)。2.各组HepG2细胞迁移率的比较经析因分析发现,异丙酚不同处理浓度各组间迁移率的差异有统计学意义(F=40044.548,P=0.000)。各个处理时间的P2、P3组迁移率均低于P1组(P<0.05),其中P2组迁移率>P3组迁移率(P<0.05)；异丙酚不同处理时间各组间迁移率的差异有统计学意义(F=51053.455,P=0.000)。异丙酚处理浓度与异丙酚处理时间这两个因素有交互效应(F=5181.341,P=0.000)。I、P1、P2、P3组处理72h的迁移率>处理48 h的迁移率>处理24 h的迁移率(P<0.05)。与C组比较,P1-3组HepG2细胞迁移率下降(P<0.05),Ⅰ组HepG2细胞迁移率上升(P=0.042)；与P1组比较,P2-3组HepG2细胞迁移率下降(P<0.05)；与P2组比较,P3组HepG2细胞迁移率下降(P=0.000)。3.各组HepG2细胞侵袭细胞数的比较与C组比较,P1～3组HepG2细胞侵袭细胞数下降(P<0.05),Ⅰ组HepG2细胞侵袭细胞数差异无统计学意义(P=0.791)；P3组侵袭细胞数<P2组侵袭细胞数<P1组侵袭细胞数(P<0.05)。4.各组HepG2细胞MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平的比较与C组比较,P1、P2、P3组MMP-2、MMP-9 mRNA表达均下调(P<0.05),其中P3组MMP-2、MMP-9 mRNA表达<P2组MMP-2、MMP-9 mRNA表达<P1组MMP-2、MMP-9 mRNA表达(P<0.05),Ⅰ组MMP-2、MMP-9 mRNA表达差异无统计学意义(P=0.753及P=0.743)。5.各组HepG2细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达水平的比较与C组比较,P1、P2、P3组MMP-2、MMP-9蛋白表达均下调(P<0.05),其中P3组MMP-2、MMP-9蛋白表达<P2组MMP-2、MMP-9蛋白表达<P1组MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05),Ⅰ组MMP-2、MMP-9蛋白表达差异无统计学意义(P=0.253及P=0.853)。结论异丙酚可呈浓度依赖性抑制人肝癌HepG2细胞的侵袭力及转移力,机制可能与下调MMP-2和MMP-9的表达有关。第三章PI3K-AKT通路在异丙酚对肝癌HepG2细胞增殖、粘附、侵袭和迁移影响中的作用目的探讨异丙酚对人肝癌HepG2细胞生长及侵袭转移能力的抑制作用是否与PI3K-AKT信号通路有关。方法人肝癌HepG2细胞接种于培养板,培养24 h后人肝癌HepG2细胞随机分为：对照组(C组)、异丙酚组(P组)、PI3K-AKT通路激动剂IGF-1组(IGF组)、PI3K-AKT通路激动剂IGF-1+异丙酚组(P+IGF组)、PI3K-AKT通路抑制剂LY294002组(LY组)及PI3K-AKT通路抑制剂LY294002组+异丙酚(P+LY组)。P组细胞加入120 μg/ml异丙酚；IGF组加入10nmol/L IGF-1; LY组加入10μmol/L LY294002孵育HepG2细胞；P+IGF组则先给予10nmol/L IGF-1孵育细胞24h,再加入120 μg/ml异丙酚处理；P+LY组也先给予10 μmol/LLY294002孵育HepG2细胞24h,再加入120 μg/ml异丙酚处理。六组处理后继续培养24 h。于24 h或48h时,采用MTS法、流式细胞仪、Annexin V-FITC/PI双染法、TUNEL+DAPI双染法分别检测各组HepG2细胞处理后的增殖率、凋亡率及细胞周期,采用Transwell法检测各组细胞处理后的侵袭细胞数,细胞划痕实验检测各组细胞处理后的细胞迁移率,RT-PCR, Wester Blot法检测各组细胞处理后MMP-2、MMP-9、PEG2、AKT及PI3KmRNA及蛋白和pAKT蛋白表达水平。统计学处理采用SPSS13.0统计学软件进行分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,各组细胞迁移率比较采用双因素方差分析,细胞增殖率、细胞凋亡率、细胞周期比例、细胞粘附率、侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9、PEG2、 AKT、 PI3K及pAKT蛋白表达组间比较采用单因素方差分析。组间多重比较采用LSD法(方差齐)或Dunnett’s T3法(方差不齐)。P<0.05为差异有统计学意义。结果1.各组HepG2细胞增殖率的比较 与C组比较,P、IGF、LY组HepG2细胞增殖率差异有统计学意义(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组HepG2细胞增殖率差异有统计学意义(P=0.000)；与LY组比较,P+LY组HepG2细胞增殖率差异有统计学意义(P=0.000); P+LY组细胞增殖率低于其它5组。2.各组HepG2细胞凋亡率的比较TNUEL法检测结果：光镜下见HepG2细胞凋亡细胞明显固缩,核致密,深染为棕黄色、多叶状或新月状颗粒,常集聚在核周边；非凋亡细胞的核呈蓝色。C组有少许细胞核被深染为棕黄色的凋亡细胞,在P、IGF、P+IGF、LY组及P+IY组凋亡细胞无明显增加。对照组及各处理组间TNUEL法检测凋亡率的差异无统计学意义(F=2.232,P=0.068)。Annexin V-FITC/PI双染法检测结果：各组HepG2细胞主要出现晚期凋亡。对照组及各处理组间Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡率的差异无统计学意义(F=1.165,P=0.349)3.各组HepG2细胞周期的比较 细胞周期图显示,C、P、IGF、P+IGF、LY组及P+IY组细胞在G1、G2/M、S期的分布比例无统计学差异(统计检验值分别为F=0.533,P=0.750; F=0.543,P=0.742;F=0.811,P=0.551)。4.各组HepG2细胞粘附率的比较单因素方差分析显示：与C组比较,P、IGF、LY组HepG2细胞粘附率差异有统计学意义(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组HepG2细胞粘附率差异有统计学意义(P=0.000)；与LY组比较,P+LY组HepG2细胞粘附率差异有统计学意义(P=0.000); P+LY组细胞粘附率低于其它5组。5.各组HepG2细胞侵袭细胞数的比较单因素方差分析显示：与C组比较,P、IGF、LY组HepG2侵袭细胞数差异有统计学意义(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组HepG2侵袭细胞数差异有统计学意义(P=0.000)；与LY组比较,P+LY组HepG2侵袭细胞数差异有统计学意义(P=0.000);P+LY组侵袭细胞数低于其它5组。6.各组HepG2细胞迁移率的比较单因素方差分析显示：与C组比较,P、IGF、LY组HepG2细胞迁移率差异有统计学意义(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组HepG2细胞迁移率下降,差异有统计学意义(P=0.000),与LY组比较,P+LY组HepG2细胞迁移率下降,差异有统计学意义(P=0.000); P+LY组细胞迁移率低于其它5组。7.各组HepG2细胞MMP-2、MMP-9mRNA及蛋白表达的比较单因素方差分析显示：与C组比较,P、IGF、LY组HepG2细胞MMP-2、MMP-9mRNA及蛋白差异有统计学意义(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组HepG2细胞MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P=0.000),与LY组比较,P+LY组HepG2细胞MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P=0.000); P+LY组细胞MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白低于其它5组。8.各组HepG2细胞PGE2,PI3K mRNA及蛋白表达的比较单因素方差分析显示：与C组比较,P、IGF、LY组HepG2细胞PGE2, PI3K mRNA及蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组HepG2细胞PGE2,PI3K mRNA及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P=0.000)；与LY组比较,P+LY组HepG2细胞PGE2,PI3K mRNA及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P=0.000); P+LY组细胞PGE2, PI3K mRNA及蛋白低于其它5组。9.各组HepG2细胞AKT及pAKT表达比值的比较单因素方差分析显示：与C组比较,P、IGF、LY组HepG2细胞AKT及pAKT表达比值差异有统计学意义(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组HepG2细胞AKT及pAKT表达比值降低,差异有统计学意义(P=0.000)；与LY组比较,P+LY组HepG2细胞AKT及pAKT表达比值降低,差异有统计学意义(P=0.000); P+LY组细胞AKT及pAKT表达比值低于其它5组。结论异丙酚抑制HepG2细胞增殖、粘附、侵袭和迁移的作用可能与抑制PI3K-AKT信号通路有关。第四章异丙酚对BALB/C小鼠肝癌移植瘤生长的影响及PI3K-AKT信号通路的作用目的探讨异丙酚对BALB/C小鼠人原发性肝癌细胞SMMC-7721移植瘤生长和PCNA、CD34、pAKT表达的影响,以及PI3K-AKT信号通路在其中的作用。方法第一部分：不同剂量异丙酚对肝癌BALB/C小鼠移植瘤生长和PCNA、 CD34、pAKT表达的影响将人原发性肝癌细胞SMMC-7721接种于BALB/C小鼠皮下,构建肝癌BALB/C小鼠移植瘤模型,40只造模成功的小鼠随机分为5组(n=8)：空白对照组(C组)、脂肪乳组(I组)、低剂量(50mg/kg)异丙酚组(P1组)、中剂量(100mg/kg)异丙酚组(P2组)和高剂量(150mg/kg)异丙酚组(P3组)。与用药前和用药后3、6、9、12、15、18天(T1、T2、T3、T4、T5、T6、T7)观察瘤体体积变化,绘制肿瘤生长曲线。用药19天后处死所有小鼠取瘤,称取瘤体重量,计算异丙酚的抑瘤率。采用免疫组化方法检测移植瘤CD34的蛋白表达,免疫荧光法检测PCNA、pAKT蛋白表达。第二部分：探讨PI3K-AKT信号通路在异丙酚抑制肝癌BALB/C小鼠移植瘤生长中的作用将人原发性肝癌细胞SMMC-7721接种于BALB/C鼠皮下,构建肝癌BALB/C小鼠移植瘤模型,48只造模成功的小鼠随机分为6组(n=8)：空白对照组(C组)、100mg/kg异丙酚组(P组)、激动剂IGF-1组(IGF组)、100mg/kg异丙酚+IGF-1组(P+IGF组)、抑制剂LY294002组(LY组)、100mg/kg异丙酚+LY294002组(P+LY组)。于用药前和用药后3、6、9、12、15、18天(T1、T2、T3、T4、T5、T6、T7)观察瘤体体积变化,绘制肿瘤生长曲线。用药19天后处死所有小鼠取瘤,称取瘤体重量,计算异丙酚的抑瘤率。采用免疫组化方法检测移植瘤CD34蛋白表达。采用免疫荧光的方法检测PCNA、p-AKT蛋白的表达。统计学方法采用SPSS13.0统计软件进行数据分析处理,计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,小鼠移植瘤体积采用重复测量方差分析,移植瘤重量、抑瘤率及PCNA、CD34和pAKT蛋白表达的比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),组间多重比较较采用LSD法(方差齐)或Dunnett’s T3法(方差不齐),以p<0.05为差异有统计学意义。结果第一部分1.小鼠成瘤及用药情况所有注射SMMC-7721的BALB/C小鼠均成瘤,成瘤率100%。在整个实验期(26天内)所有小鼠一般情况良好,饮食无明显变化。用药后观察小鼠呼吸,均未出现呼吸抑制及死亡情况。处死小鼠后解剖未发现有全身其它器官的转移现象。2.各组肿瘤体积比较 用药前后五组肿瘤体积比较差异有统计学意义(F=2723876,P=0.000),用药前各组肿瘤体积比较差异无统计学意义(F=0.226,P=0.920)。五组7个时点肿瘤体积比较差异有统计学意义(F=199868.0,P=0.000),随时间点肿瘤体积增加；与C组比较,Ⅰ组肿瘤体积差别无统计学意义(P=0.924)；P1、P2、p3组T2～7时肿瘤体积依浓度升高而减小,差异有统计学意义(P<0.05)。用药前后与不同药物处理间有交互效应(F=84927.589,P=0.000)。3.各组移植瘤重量及抑瘤率比较与C组比较,Ⅰ组瘤体重量差别无统计学意义(P=0.997),P1、P2、P3组瘤体重量依次减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。4.各组移植瘤抑瘤率比较与C组比较,Ⅰ组抑瘤率差别无统计学意义(P=0.817),P1、P2、P3组抑瘤率依次增加,差异有统计学意义(P<0.05)。5.肿瘤组织PCNA、CD34、pAKT蛋白的表达与C比较,Ⅰ组PCNA、CD34、 pAKT蛋白表达差别无统计学意义(P=1.000,P=0.999,P=1.000),P1、P2、P3组PCNA、CD34、pAKT蛋白表达依次下调,差异有统计学意义(P<0.05)。第二部分1.小鼠成瘤及用药情况所有注射SMMC-7721的BALB/C小鼠均成瘤,成瘤率100%。在整个实验期所有小鼠一般情况良好,饮食无明显变化。用药后观察小鼠呼吸,均未出现呼吸抑制及死亡情况。处死小鼠后解剖未发现有全身其它器官的转移现象。2.各组移植瘤体积比较 用药前后六组肿瘤体积比较差异有统计学意义(F=579277.387,P=0.000),用药前各组肿瘤体积比较差异无统计学意义(F=145.116,P=0.920)。六组7个时点肿瘤体积比较差异有统计学意义(F=3465338,P=0.000),随时间点肿瘤体积增加；与C组比较,IGF组移植瘤体积增大(P=0.000),P组、LY组及P+LY组移植瘤体积减小(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组移植瘤体积减小,差异有统计学意义(P=0.000),与LY组比较,P+LY组移植瘤体积减小,差异有统计学意义(P=0.000)；P+LY组移植瘤体积比其它5组小(P<0.05)。用药前后与不同药物处理间有交互效应(F=85398.671,P=0.000)。3.各组移植瘤重量比较各组移植瘤重量比较差异有统计学意义(F=24280.784,P=0.000)；与C组比较,IGF组移植瘤重量增大(P<0.05),P组、LY组及P+LY组移植瘤重量减小(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组移植瘤重量减小,差异有统计学意义(P=0.000),与LY组比较,P+LY组移植瘤重量减小,差异有统计学意义(P=0.000)；六组中,P+LY组移植瘤重量最小。4.各组移植瘤抑瘤率比较 各组移植瘤抑瘤率比较差异有统计学意义(F=446972.709,P=0.000)；与C组比较, IGF组抑瘤率为负值,差异有统计学意义(P=0.000),P组、LY组及P+LY组抑瘤率增加(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组抑瘤率增加,差异有统计学意义(P=0.000),与LY组比较,P+LY组抑瘤率增加,差异有统计学意义(P=0.000)；六组中,P+LY组抑瘤率最大。5.各组移植瘤重量组织PCNA、CD34、pAKT蛋白的表达比较各组移植瘤组织PCNA、CD34、pAKT蛋白比较差异有统计学意义(分别为F=6535.517,P=0.000; F=3214.185,P=0.000; F=13881.71,P=0.000);与C组比较,IGF组移植瘤组织PCNA、CD34、pAKT蛋白表达上调(P<0.05),P组、LY组及P+LY组移植瘤组织PCNA、CD34、pAKT蛋白表达下调(P<0.05)；与IGF组比较,P+IGF组移植瘤组织PCNA、CD34、pAKT蛋白表达下调,差异有统计学意义(P=0.000),与LY组比较,P+LY组移植瘤组织PCNA、CD34、pAKT蛋白表达下调,差异有统计学意义(P=0.000)；六组中,P+LY组移植瘤组织PCNA、CD34、pAKT蛋白表达最少。结论 在一定范围内,异丙酚可以剂量依赖性的抑制肝癌BALB/C小鼠移植瘤的生长及PCNA、CD34、pAKT表达；其机制可能与抑制PI3K-AKT途径有关。