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庭院月季品种‘光叶蔷薇’(Rosa wichuriana ’Basye’s thornless’)是通过光叶蔷薇培育的园艺杂交品种,它具有的一年一次开花习性、花白色、五瓣花、茎匍匐等性状是目前月季育种主要目标性状如连续开花、花色丰富、重瓣和茎直立等的相对性状,其再生体系及转化体系的建立将为月季的花色、花期、花的瓣性等性状相关基因的功能验证奠定基础,对这些性状的遗传规律研究和分子育种具有重要的意义。本试验以‘光叶蔷薇’为材料,建立了组培快繁体系,系统开展了器官直接发生途径和器官间接发生途径研究及遗传转化的初步研究。此外,本研究还对‘光叶蔷薇’体细胞胚发生途径进行了初步尝试,并对其愈伤组织发育过程进行了细胞学观察。主要的研究结果如下：1.‘光叶蔷薇’组培快繁体系的建立以‘光叶蔷薇’带腋芽的茎段为外植体,建立快繁体系。对影响‘光叶蔷薇’继代增殖和无菌苗生根的条件进行了研究。结果表明：适合‘光叶蔷薇’增殖的培养基是：MS+0.lmg/L6-BA+0.05mg/LNAA+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂(pH5.8-6.0)；适合‘光叶蔷薇’无菌苗的生根培养基是：1/2MS+0.05mg/L IBA+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂(pH5.8-6.0),生根率为100%。2.‘光叶蔷薇’的叶片直接再生体系的建立以‘光叶蔷薇’的顶生幼嫩叶片为外植体,探讨了叶片幼嫩程度、暗培养时间和植物生长调节剂组合对不定芽诱导的影响。研究结果表明：‘光叶蔷薇’小叶的幼嫩程度不同,不定芽的诱导率有显著的差异,顶生幼嫩小叶的诱导率最高,为16.80%；不同的暗培养时间下不定芽的诱导率存在显著的差异,暗培养时间为12d时不定芽的诱导率最高,为16.00%；在诱导培养基11/2MS+1.5mg/LTDZ+0.05mg/L NAA+100mg/L CH+10mg/L AgNO3+30g/L葡萄糖+6.5g/L琼脂(pH5.8-6.0)上暗培养12d后转接到分化培养基MS+0.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+1.0mg/LGA3+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝胶(pH5.8-6.0)上光下培养25d后,不定芽的诱导率最高,为10.38%。3.‘光叶蔷薇’器官间接再生体系的建立以‘光叶蔷薇’的顶生幼嫩小叶为外植体,筛选愈伤组织诱导、愈伤组织分化的最佳培养基,并对影响愈伤组织分化的培养基、培养条件、培养基添加物等因素进行了探讨。研究结果表明：‘光叶蔷薇’小叶外植体最适的愈伤组织诱导培养基是：MS+7.0mg/LNAA+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝胶(pH5.8-6.0),愈伤组织诱导率为87.50%,愈伤组织松软、乳白色、颗粒状；继代增殖的愈伤组织转接在分化培养基MS+5.0mg/L TDZ+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝胶(pH5.8-6.0)上暗培10d后光下培养25d,不定芽分化率最高,为18.34%。4.‘光叶蔷薇’体细胞胚发生途径的初步研究以‘光叶蔷薇’的顶生幼嫩小叶为外植体,通过直接途径和间接途径对体细胞胚诱导的条件进行了研究。结果表明：通过直接发生途径和间接发生途径均未得到‘光叶蔷薇’的体细胞胚。间接发生途径在培养基MS+1.0mg/LTDZ+0.1mg/LNAA+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝胶(pH5.8-6.0)或MS+5.0mg/LTDZ+0.5mg/LNAA+1.0mg/LGA3+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝胶(pH5.8-6.0)上可以得到‘光叶蔷薇’假珠芽,并得到再生植株。5.愈伤组织细胞学观察选取愈伤组织诱导至分化各阶段材料进行石蜡切片显微观察,增殖的胚性愈伤进行超薄切片超显微观察。结果表明：外观色泽鲜亮、基本为浅黄色或浅绿色、培养过程中不易褐化的愈伤组织,其细胞排列紧密,多数为圆形或近圆形,细胞壁很薄,通常有很大的细胞核,占整个细胞体积的比例较大,细胞质浓厚。这类愈伤组织多具有胚性,易于分化。6.初步建立了‘光叶蔷薇’GUS基因转化体系根据本研究建立的‘光叶蔷薇’的两种再生体系,以其小叶和愈伤组织作为转化受体进行GUS报告基因的遗传转化。农杆菌侵染的小叶和愈伤组织经GUS染液染色,计算GUS基因瞬时表达率,以此判定各因素对‘光叶蔷薇’遗传转化的影响。结果表明：对‘光叶蔷薇’遗传转化影响最大的是外植体的类型,愈伤组织GUS基因瞬时表达显示为阳性,小叶外植体在不同的条件下对农杆菌的侵染均不敏感,GUS基因瞬时表达显示为阴性；除外植体类型外,影响‘光叶蔷薇’遗传转化的重要因素还有菌液浓度(OD600)、侵染时间、共培养基中AS的浓度及共培养时间等。