滚环扩增（rolling circle amplification,RCA）作为一种等温信号放大技术,具有操作简单,扩增能力强等优点,并为DNA自组装材料的设计与制备提供了新思路和新方法。本文将RCA技术应用于DNA花型结构的自组装,通过负载酶分子,将其作为信号放大探针,与比色法、电化学传感器相结合,实现了凝血酶、葡萄糖等生物分子的高灵敏、高特异性检测,在DNA自组装、信号放大分析检测、生物传感器的构建等方面具有广阔的应用前景。本论文主要开展了以下三方面工作:一、基于滚环扩增自组装DNA花型结构封装辣根过氧化物酶构建比色法生物传感器检测凝血酶本工作通过RCA反应自组装形成微米级DNA花,并在RCA过程中封装大量辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）分子,对其几何形态、形貌特征、封装效能、催化活性等进行了系统研究。由于RCA产物中含有大量重复的凝血酶适体（Apt29）序列,采用磁性微粒作为载体,通过双适体识别形成适体-凝血酶-DNA花三明治结构,通过封装在DNA花中的HRP催化刻蚀金纳米棒（gold nanorods,AuNRs）,构建了比色法生物传感器,实现了凝血酶的高灵敏、高特异性检测。此外,通过磁性分离极大地降低了检测背景值,对凝血酶的检测限达0.22 fM,且表现出良好的选择性,并应用于实际样品中凝血酶的分析检测。二、基于滚环扩增自组装DNA花型结构封装辣根过氧化物酶构建电化学生物传感器检测凝血酶通过RCA反应制备封装HRP的亚微米级DNA花型结构,将Apt29的互补序列设计进入环状模板中,实现了Apt29的线性扩增。将凝血酶的另一条适体Apt15固定到电极表面,通过凝血酶与适体间的特异性识别作用将凝血酶捕获到电极表面,进而与封装HRP的DNA花型结构结合,形成适体-凝血酶-DNA花三明治结构。在H₂O₂存在时,HRP催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）氧化,产生电子转移和电信号。由于DNA花型结构对HRP分子具有较高的封装效率,极大地提高了检测灵敏度,对凝血酶的检测限达1 fM,且表现出良好的选择性。三、基于滚环扩增自组装DNA花型结构封装双酶分子构建电化学葡萄糖传感器在RCA反应过程中同时加入HRP和葡萄糖氧化酶（glucose oxidase,GOx）,得到封装两种酶的DNA花型结构（HRP-GOx-DFs）。对其内部组成、形貌形态、封装效能、催化活性进行了系统研究。由于高密度的磷酸基团和酶催化级联反应,HRP-GOx-DFs的催化活性较未封装的酶催化活性显著提高。进一步,采用HRP-GOx-DFs修饰电极,制备得到葡萄糖电化学生物传感器,极大地提高了葡萄糖的检测灵敏度,检测限为3.87μM。此外,制得的电化学生物传感器对葡萄糖具有良好的选择性。