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[目的]:研究酪氨酸蛋白激酶受体EphB4基因在胶质瘤U251细胞中的表达及其功能特性,寻找诊断、治疗胶质瘤的新方法和途径,并为判断恶性胶质瘤预后提供有用指标。[方法]:1、RT-PCR检测U251细胞和U87细胞系中EphB4和EphA2基因的表达情况;2、体外构建shRNA真核表达载体,进一步为体内试验奠定基础;3、体外合成特异siRNA,采用脂质体转染的方法导入胶质瘤U251细胞系中,并观察和检测其对U251细胞中EphB4基因表达的抑制情况;4、观察特异siRNA转入U251细胞后是否引起细胞增殖减慢及诱发细胞凋亡,以研究EphB4基因在胶质瘤的生长和侵袭转移方面的作用机制;5、研究siRNA对祼鼠体内成瘤的影响。[结果]:1、通过基因水平检测,EphB4和EphA2两基因在U251和U87细胞中表达水平存在差异;2、经测序鉴定及电泳证明已成功构建了针对EphB4基因的shRNA真核表达载体,脂质体转染细胞后可有效抑制EphB4基因表达;3、经体外化学合成靶向EphB4基因的特异性siRNA,转染U251细胞中,可有效抑制EphB4基因的mRNA表达水平,在实验中转染siRNA- EphB4 100nm/L后,使EphB4mRNA的表达水平下降了75.0%;4、抑制EphB4基因表达使肿瘤细胞的增殖能力减弱,使肿瘤细胞生长不同程度地阻滞于亚G1期,出现凋亡峰,并且细胞的迁移能力与对照组比较有所下降,transwell小室穿膜细胞数与对照组比较有明显差异;5、成功建立祼鼠U251细胞皮下移植瘤模型,治疗四周后siRNA组肿瘤体积较生理盐水组缩小,病理学检查siRNA组肿瘤细胞生长受到抑制,细胞散在稀疏。[结论]:1、EphB4和EphA2基因在U251细胞系中的表达水平明显高于U87细胞系,提示两种不同的细胞系可能在致瘤机制上存在差异,为研究肿瘤的发病机制提供一定的线索;2、我们构建的shRNA真核表达载体可特异抑制该基因的表达,达到类似基因敲除的效果,并且在长期稳定表达载体的细胞系中,双链RNA能够长期发挥阻断基因表达的作用;3、应用RNA干扰技术可以有效抑制靶基因的表达,在转染特异siRNA后出现肿瘤细胞的生长阻滞,诱导凋亡,表明EphB4基因在胶质瘤U251细胞的恶性进展与恶性侵袭转移中发挥着关键性作用。结合我们以往的工作经验可见RNA干扰作用可有效地应用于肿瘤的基因治疗领域,并且为研究酪氨酸激酶Eph家族在胶质瘤的恶性进展中所发挥的作用提供实验基础,进一步为恶性肿瘤的基因治疗提供了新思路。