肢体远程缺血后处理对兔脊髓缺血损伤的保护作用及机制研究

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背景与目的:脊髓缺血/再灌注损伤,可导致脊髓神经功能障碍,甚至截瘫,临床逆转十分困难。近年来,怎样预防和减轻脊髓缺血/再灌注损伤成为脊髓保护领域的热点问题,同时也是临床医学中亟待解决的难题。目前有许多研究已经证实远程缺血后处理对许多重要器官均具有保护作用,但对脊髓缺血/再灌注损伤是否具有保护作用研究较少。本研究拟在兔脊髓缺血/再灌注损伤模型上,探讨肢体远程缺血后处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用,同时研究ATP敏感性钾离子通道和阿片类受体是否参与肢体远程缺血后处理的保护机制。方法:新西兰大白兔,共42只,随机分为7组:假手术组(Sham组)、缺血组(SCII组)、远程缺血后处理组(RIPostC组)、格列苯脲组(GLI组)、二氮嗪组(DIA组)、纳洛酮组(NAL组)、吗啡组(MOR组),每组6只,通过阻断左肾动脉下腹主动脉25min建立脊髓缺血再灌注模型。Sham组动物只分离暴露左肾下腹主动脉,不加以阻断。RIPostC组动物在开放腹主动脉前2min立即在双下肢腘窝上1/3给予止血带200mmHg,压迫5min,松开5min,重复三次。GLI组、DIA组、NAL组、MOR组的动物在阻断腹主动脉前10min、30min、10min、10min分别给予格列苯脲1mg/kg、二氮嗪3mg/kg、纳洛酮1mg/kg、吗啡1mg/kg,同时在开放腹主动脉前2min即刻行双下肢缺血后处理(同RIPostC组)。恢复腹主动脉灌注后4h、12h、24h、48h,按照改良Tarlov评分标准对动物后肢运动功能进行神经行为学评分;并在腹主动脉再灌注后48h,经灌注固定后,对腰段脊髓进行病理学组织检查,在光镜下计数各组脊髓前角中形态正常的运动神经元。结果:1.神经行为学评分:术前所有动物后肢运动功能均正常,评分均为4分。(1)组间比较:脊髓缺血再灌注后4h后肢运动功能评分:Sham组与MOR组之间统计学无差异(P>0.05),SCII组、RIPostC组、GLI组、DIA组、NAL组各组均低于Sham组,差异具有统计学意义(P<0.05),其中,SCII组、GLI组、NAL组三组之间,DIA组与RIPostC组之间,DIA组与NAL组两组之间无统计学差异(P>0.05)。其余各组之间均有统计学差异(P<0.05)。再灌注12h、24h、48h后肢运动功能评分:Sham组、MOR组、DIA组、RIPostC组各组明显高于NAL组、GLI组、SCII组(P<0.05);其中,NAL组与GLI组显著高于SCII组(P<0.05);Sham组、MOR组、DIA组、RIPostC组之间,NAL组与GLI组之间均无统计学差异(P>0.05)。但NAL组与GLI组于再灌注24h后肢运动功能评分具有统计学差异(P<0.05)。(2)组内比较:Sham组与MOR组各时点均无统计学差异(P>0.05);SCII组与GLI组再灌注12h评分显著高于其它时点(P<0.05),其余各时点间无统计学差异(P>0.05)。RIPostC组和DIA组再灌注4h评分显著低于其它时点(P<0.05),其余各时点间无统计学差异(P>0.05);NAL组再灌注4h评分明显低于12h(P<0.05),其余各时点间无统计学差异(P>0.05)。2.脊髓前角正常运动神经元计数:再灌注48h时脊髓前角正常神经元计数SCII组、RIPostC组、GLI组、DIA组、NAL组、MOR组均显著低于Sham组(P<0.05),其中,SCII组与GLI组两组间,RIPostC组、DIA组、MOR组之间无差异(P>0.05),其余各组间均有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)肢体远程缺血后处理对兔脊髓缺血再灌注损伤有神经保护作用。(2)ATP敏感性钾离子通道和阿片类受体参与了肢体远程缺血后处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用,其激动剂二氮嗪与吗啡不能增强该保护作用,但其阻滞剂格列苯脲与纳洛酮可减弱该保护作用,且二者减弱该保护作用的程度无差异。
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