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利用转基因技术对家禽进行遗传改良不仅可以改善禽肉、蛋的产量和品质,给社会带来巨大的经济效益;作为功能基因研究的模型,转基因鸡在发育生物学等基础研究领域同样具有潜在的研究价值。然而,由于禽类具有独特的生殖生理和繁殖方式,已趋成熟的小鼠转基因操作技术不能直接应用于禽类,寻找合适的方法实现禽类的遗传改良成为部分研究者的目标。在现有的禽类转基因技术中,X期胚盘直接注射法以其操作简单,生殖腺嵌合率高而备受研究者的青睐。目前这一技术的瓶颈在于其转基因存活率低下,为了提高转基因鸡的成活效率,本试验研究了影响嵌合体鸡成活的种种因素,并且简化操作步骤,为以后规模化生产转基因鸡做好准备。本研究以黑羽的寿光鸡为供体,自来航鸡为受体,赤道面开窗,机械打碎X期胚盘后直接注射入同期受体胚盘胚下腔进行试验。总计注射939枚种蛋,孵化出壳93只活雏,平均孵化成活率9.90%;14只嵌合体活雏,其中表观嵌合体6只,非表观嵌合体8只。14只嵌合活雏中有1只生殖腺嵌合体,嵌合比率为7.14%,另外还得到了8只嵌合体死雏,其中3只生殖腺嵌合体,嵌合比率37.5%,表明性腺嵌合有可能对鸡胚的正常发育产生了不好的作用。
试验结果表明:嵌合体鸡制作完成后创口向上平放16小时对鸡胚发育有利;内壳膜的完整性对于嵌合体鸡成活率具有举足轻重的影响,内壳膜完整组的出雏率(41%)极显著高于内壳膜破损组(10%);不同的补液方式对鸡胚发育的影响不显著。对上述活雏及嵌合死雏通过供受体特异基因PRLpro2和性别特异性基因片段CHD检测供体细胞的嵌合规律表明:供体细胞可以随机整合到受体内、中、外三个胚层,其中外胚层(尤其是脑和眼中)嵌合比率很高,分别占已嵌合体雏鸡的50%和40.9%。供体细胞迁移规律的研究为后期供体细胞的定点整合,以及器官发生的规律积累了一定的素材。