低强度超声联合斑蝥酸钠诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

来源 :陕西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangzhengm
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背景与目的:原发性肝癌(PHC)属于常见的恶性肿瘤之一,在我国也是高发地之一,早期首选手术治疗,但大多数患者由于缺乏典型临床症状,发现时多进入中晚期,失去手术机会。目前治疗原则:采用联合、有序的多种非手术方法进行治疗,根据个体情况设计治疗方案,争取二期手术切除或完整灭活肿瘤。但是,由于放疗、化疗毒副作用大,所以疗效并不理想。斑蝥酸钠(SCA)是斑蝥素的半合成衍生物,它保留了斑蝥素的抗肿瘤特性,降低了毒性,目前,临床主要用于肝癌的治疗。大量研究证明,斑蝥酸钠(SCA)能够有效抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。也有学者将 SCA与其他化疗药物相结合,旨在增强 SCA的抗肿瘤特性,然而仍然避免不了化疗药物的毒副作用。低强度超声指输出强度小于3W/cm2,对人体组织不构成不可逆损害的治疗。它对肿瘤细胞具有杀伤效应但对周围正常细胞无明显不可逆损害。因此,本实验旨在将斑蝥酸钠与低强度超声联合应用,探讨两者对肝癌细胞是否存在协同增效的抑制,从而为中药SCA联合低强度超声治疗肿瘤提供细胞学水平的实验依据。  材料与方法:采用倒置显微镜观察和MTT法检测低强度超声联合斑蝥酸钠作用后肝癌HepG2细胞的增殖抑制情况;应用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒检测超声联合斑蝥酸钠对 HepG2细胞凋亡以及细胞凋亡周期的影响;并且通过 Fluo3-AM钙离子荧光检测试剂盒,检测细胞内钙离子浓度的变化;通过透射电子显微镜观察超声联合斑蝥酸钠作用后细胞内超微结构变化的情况。  结果:以2.5μg/ml浓度的斑蝥酸钠与肝癌HepG2细胞孵育30min后,再用0.5W/cm2×8s的低强度超声辐照,细胞抑制率比单纯 SCA处理组及单纯超声处理组的抑制率明显增高,并且差异具有统计学意义;倒置显微镜下观察,超声联合斑蝥酸钠处理组的细胞数量较其他三组明显减少,细胞固缩,细胞间隙增大,并可见大量的细胞碎片;AnnexinV-FITC/PI染色后细胞凋亡检测发现联合组在超声处理细胞后6h的早期凋亡率为20.3%,而晚期凋亡率为1.9%;细胞凋亡周期检测,肝癌HepG2细胞在 G0/G1期出现了细胞周期阻滞;Fluo3-AM检测细胞内钙离子浓度,联合组在处理后6h的细胞内钙离子浓度远高于其他三组,且差异具有统计学意义;透射电镜观察到联合组在处理细胞后6h出现了凋亡小体,线粒体肿胀,内质网肿胀。  结论:  1.低强度超声(0.5W/cm2)与斑蝥酸钠(2.5μ g/ml)联合应用,确实对肝癌HepG2细胞产生了协同增效的抑制作用,且分别呈现浓度依赖性、强度依赖性。  2.低强度超声(0.5W/cm2)联合斑蝥酸钠(2.5μ g/ml)协同增效的诱导肝癌HepG2细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期。  3.低强度超声(0.5W/cm2)联合斑蝥酸钠(2.5μ g/ml)协同诱导肝癌 HepG2细胞凋亡可能是由于破坏了细胞内钙平衡稳态,故考虑与内质网、线粒体凋亡途径密切相关。  因此,低强度超声联合斑蝥酸钠的治疗可以被考虑为肝癌治疗的一种新型模式,此种治疗方式,副作用低、操作方式简易、价格低廉有潜在的应用价值,值得进一步研究、推广。
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