子宫内膜炎是奶牛分娩后最常见的繁殖疾病,通常导致奶牛子宫和卵巢机能紊乱,产犊间隔延长,受胎率下降,产奶量降低等,严重影响奶牛生产的经济效益。本试验通过体外培养和分子生物学技术,研究奶牛产后21-30d子宫内大肠杆菌血清型、耐药性、子宫黏液性状、大肠杆菌系统发育组和毒力因子之间的相互关系。以期有针对性地预防和治疗奶牛分娩后子宫内膜炎,为奶牛生产实践提供有利的试验数据和理论支持。一产后奶牛子宫内大肠杆菌的分离和血清型鉴定选取产后21-30d的荷斯坦奶牛,其中健康奶牛25头和子宫内膜炎奶牛35头,分别采集子宫黏液,并测量体温。选择性培养基体外分离、培养产后奶牛子宫黏液内的大肠杆菌,60头奶牛中43头(71.7%)分离到大肠杆菌,其中25头健康奶牛中18头牛分离到61株大肠杆菌；33头患子宫内膜炎奶牛中25头牛分离到84株大肠杆菌。结果说明产后21-30d,奶牛子宫内大肠杆菌的分离率较高。分离的145株大肠杆菌进行血清学分型鉴定结果为,96株分属于不同的15种血清型,3株发生自溶和46株未能确定,其中84株(87.5%)属于7种常见血清型,即O2、O5、O26、O44、O73、O86和O111,但O2(3株)和086(4株)仅出现在患病奶牛中,占定型大肠杆菌的7.3%,可能为致病性较强的大肠杆菌。二产后奶牛子宫内大肠杆菌系统发育分析和耐药性研究通过PCR技术对分离到的145株大肠杆菌进行系统发育分析,并利用抗生素药敏纸片测定大肠杆菌在体外对23种抗菌药物的敏感性。结果显示,145株大肠杆菌属于系统发育组A(n=51,占分离总数的35.2%)、B1(n=87,占分离总数的60.0%)、D(n=7,占分离总数的4.8%),未分离到B2型大肠杆菌。进一步数据分析结果显示,产后患子宫内膜炎的奶牛子宫内A型大肠杆菌比例显著比产后健康的奶牛数量多(P<0.05)；D型大肠杆菌在健康奶牛子宫内的分布相对患病奶牛多,但差异不显著；B1型大肠杆菌在产后奶牛子宫内均有分布,差异不显著。推断A型大肠杆菌可能是导致奶牛子宫内膜炎的主要致病菌,B1型大肠杆菌可能为宿主体内常见的原著大肠杆菌或为条件性的潜在致病菌,D型大肠杆菌可能不具有较强的致病性。145株大肠杆菌对23种抗生素的耐药性试验结果显示,131株大肠杆菌(83.35%)对1种及以上抗生素耐药,多重耐药性最强的大肠杆菌对16种抗生素都具有耐药性；患病奶牛子宫内大肠杆菌的耐药性强于健康奶牛,其中A型大肠杆菌多重耐药性强于B1型大肠杆菌。三产后奶牛子宫内大肠杆菌指纹图谱和毒力因子研究结合血清型鉴定和大肠杆菌系统发育组分析,根据145株产后奶牛子宫内大肠杆菌的RAPD指纹图谱,可将系统发育组中相同的大肠杆菌进一步细分为亚群,并利用基于Dice模式的UPGMA算法对不同性状子宫黏液内大肠杆菌进行聚类分析,同时通过PCR技术确定20种毒力基因在大肠杆菌中的分布。试验结果表明,奶牛分娩中与感染子宫内膜炎相关的风险因素由高到低依次为：头胎分娩>胎衣不下>产雄性犊牛>死胎>双胎。145株大肠杆菌可以划分为4个主要的簇,簇之间相似性相对较低,由同一头牛所分离的大肠杆菌相似性较高,不同簇间大肠杆菌系统发育组分布不同,其中A型大肠杆菌主要分离自患病奶牛,B1型大肠杆菌有可能与化脓性炎症出现有关,与较严重的子宫内膜炎相关；D型大肠杆菌与患病没有明显相关关系。某些簇中,O44大肠杆菌与子宫内膜炎奶牛严重脓性炎症的出现相关,但血清型与大肠杆菌系统发育组没有明显相关关系。大肠杆菌毒力基因PCR检测结果表明,20种毒力因子中共检测出10种,每株大肠杆菌至少含有5种,最多含有9种毒力因子。其中fimH和OmpA在奶牛患病风险中统计发现两种毒力因子风险因素均大于1。fimH与奶牛患病状况有显著相关关系(P<0.05),在fimH存在并含有另外一种或一种以上毒力因子的条件下,大肠杆菌的分离率明显增加。大肠杆菌系统发育组与毒力因子之间没有发现明显相关关系。