第一部分 miR-338-3p对神经母细胞瘤的增殖和侵袭的抑制作用的研究　　目的:探讨microRNA-338-3p(miR-338-3p)对神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH和SK-N-MC增殖、侵袭和迁移能力的影响，miR靶基因的确定及靶基因功能的研究。　　方法: miRNA芯片结果发现miR在神经母细胞瘤中低表达，利用实时定量PCR验证其结果。利用脂质体LipofectamineTM2000将miR-338-3p mimics和miR-338-3p的反义寡核苷酸链(ASO)以及对照质粒分别瞬时转染SK-N-SH和SK-N-MC两种细胞系，MTT法和克隆形成实验检测神经母细胞瘤细胞转染后的增殖情况，Transwell侵袭小室实验检测转然后细胞的体外侵袭及迁移的能力。利用生物信息学技术预测miR-338-3p的靶基因，并应用EGFP荧光报告载体实验，实时荧光定量PCR和Western blot实验对靶基因进行验证。并利用实时定量PCR检测神经母细胞瘤中靶基因的表达。最后，将靶基因的敲降质粒和过表达质粒以及对照空质粒分别瞬时转染细胞， MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖情况， Transwel l侵袭小室实验检测细胞的体外侵袭及迁移能力。　　结果:实时定量PCR显示与癌旁正常组织相比，miR-338-3p在神经母细胞瘤细胞中低表达(P＜0.01);癌细胞转染miR-338-3p mimics后，细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比是减弱的(P＜0.01)，而在转染了miR-338-3p的ASO封闭miR-338-3p的表达后，细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比是增强的(P＜0.01)。利用生物信息学方法将RAB14基因作为miR-338-3p的候选靶基因，EGFP荧光报告载体实验显示过表达miR-338-3p可以抑制含有miR-338-3p结合位点的报告载体的荧光量(P＜0.01)，而将结合位点的碱基进行突变后miR-338-3p对靶基因3UTR的抑制作用则消失。实时荧光定量PCR和Westernblot结果表明过表达miR-338-3p可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制RAB14的表达(P＜0.01)，而用ASO抑制miR-338-3p的表达后RAB14的水平升高(P＜0.01)。实时定量PCR结果显示靶基因RAB14在神经母细胞瘤中呈现高表达(P＜0.01)。最后，癌细胞转染敲降RAB14的质粒pSilencer/shR-RAB14后，细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力降低(P＜0.01)，而过表达靶基因RAB14后，细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力增强(P＜0.01)。　　结论: RAB14是miR-338-3p的直接靶基因，miR-338-3p通过抑制RAB14的表达而抑制神经母细胞瘤细胞的增殖及侵袭和迁移能力。　　第二部分 miR-92对神经母细胞瘤细胞增殖的促进作用的研究　　目的探讨microRNA-92（miR-92）对神经母细胞瘤细胞增殖的促进作用，并预测miR-92的靶基因。　　方法:利用实时定量PCR技术检测15对神经母细胞瘤组织和癌旁正常组织中miR-92的表达水平;人工设计合成miR-92的反义寡核苷酸（anti-miR-92寡核苷酸），利用脂质体LipofectamineTM2000转染神经母细胞瘤SK-N-SH和SK-N-BE2细胞系，利用实时定量PCR检测转染后细胞内miR-92的表达水平，并通过噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测细胞的增殖和凋亡情况;利用生物信息学方法对miR-92的候选靶基因进行预测。　　结果:与癌旁正常组织相比，miR-92在神经母细胞瘤组织中表达水平升高;与对照组细胞相比，两种神经母细胞瘤细胞转染anti-miR-92后，miR-92的水平降低，MTT检测细胞的活性降低，流式分析仪检测发现增殖的细胞数降低，而细胞凋亡数增加，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。通过生物信息学和对靶基因潜在功能分析，初步选定BCL2-1ike11(BCL2L11)和phosphatase and tensin homolog deletedon chromosome ten(PTEN)作为是miR-92的候选靶基因。　　结论:抑制miR-92的表达导致神经母细胞瘤细胞的增殖降低，凋亡增加，从而可能进一步影响神经母细胞瘤的生长，miR-92可能具有作为临床上神经母细胞瘤治疗分子标记物的潜在功能，为以后更有意义的分子治疗奠定基础。　　第三部分 miR-34a对神经母细胞瘤细胞生长、侵袭和迁移的影响　　目的:检测miR-34a在原发性和转移性神经母细胞瘤组织中的表达水平，并探讨miR-34a对神经母细胞瘤细胞生长、侵袭和迁移的影响。　　方法:收集18例神经母细胞瘤患者（神经母细胞瘤原发部位以及转移部位），利用实时定量PCR检测miR-34a在原发性和转移性神经母细胞瘤组织中的表达水平。在神经母细胞瘤细胞中瞬时转染miR-34a mimics，利用平板克隆形成实验、MTT、侵袭实验和体外划痕实验检测miR-34a对细胞生长、侵袭和迁移的影响。最后利用Western印迹检测miR-34a对生长以及侵袭迁移相关蛋白表达水平的影响。　　结果:与原发性神经母细胞瘤组织相比，miR-34a在转移性神经母细胞瘤组织中表达降低。与对照细胞组相比，转染miR-34a mimics的细胞克隆数目降低(SH-SY5Y:24±3.07vs43±6.29和IMR-32:17±2.36vs37±5.41)，细胞活性下降，并且细胞侵袭和迁移能力也降低（差异具有统计学意义）。Western结果显示miR-34a抑制CD44、CDK4、CCND1和CCNE2的蛋白水平。　　结论: miR-34a分别通过降低CD44、CDK4、CCND1和CCNE2的表达水平，而抑制神经母细胞瘤细胞的生长、侵袭和迁移，发挥着肿瘤抑癌基因的作用，提示miR-34a可能作为神经母细胞瘤分子治疗的靶点。