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核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)是一种世界性的植物病原真菌,其寄主范围十分广泛,每年都造成巨大的经济损失。在致病过程中,核盘菌能够形成侵染结构——侵染垫,以利于其附着并刺穿寄主植物表面。此外,核盘菌能够合成并分泌草酸与细胞壁降解酶类等致病相关因子,以利于其抵御寄主防卫反应并侵染寄主植物。C2H2型锌指蛋白是真核生物中最大的转录因子超家族,但真菌中的相关研究较少。C2H2型锌指蛋白的功能主要集中于生长发育、分生孢子形成、有性生殖、致病性、耐药性以及胁迫应答等方面。核盘菌SsZFH1蛋白在氨基酸序列的C端含有1个C2H2型锌指结构域,故属于C2H2型锌指蛋白家族。本研究克隆得到Sszfh1基因上游944 bp序列(L)与下游929 bp序列(R),将上下游序列连接至敲除载体pXEH上以得到pXEH-L-R重组质粒,将重组质粒转入野生型核盘菌原生质体内对Sszfh1基因进行敲除,经过抗性筛选与PCR检测后得到两株Sszfh1基因敲除突变体菌株。本研究构建了Sszfh1基因回补载体pNDH-OGG-Sszfh1,将该载体转入Sszfh1基因敲除突变体的原生质体内,经过抗性筛选与PCR检测后得到一株表型与野生型基本一致的Sszfh1基因回补菌株。通过表型观察实验发现:(1)在生长发育方面,敲除突变体菌丝生长速率下降,菌丝偶有直角分枝结构且趋于密集生长,菌落形态改变,菌核形成位置改变,菌核数量增多而总干重下降。(2)在致病性方面,敲除突变体能够合成草酸并形成侵染垫,对离体植物叶片的致病性下降,但仍能正常刺穿寄主植物。(3)在非生物胁迫应答方面,敲除突变体对高盐环境更为敏感,对高渗环境更为敏感,对农药与细胞壁破坏物质的耐受性急剧下降,而对活性氧的耐受性明显增强。对敲除突变体体内胁迫应答与活性氧合成相关基因的表达模式分析发现,敲除突变体的Sssop1、Ssnox1与Ssnox2基因的表达水平下降,说明Sszfh1基因可能参与胁迫应答的调控过程。本研究初步分析了Sszfh1基因的生物学功能,拓展了分子生物学水平上对核盘菌生长发育与致病机制的研究,为核盘菌体内锌指蛋白的后续研究奠定了基础,为菌核病的综合防治提供了新的理论与思路。