肽结合与游离氨基酸比例对离体乳腺组织酪蛋白合成的影响

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研究证实,血液中的小肽可以作为乳蛋白合成的前体,参与乳腺酪蛋白的合成。但是,酪蛋白表达最高水平时小肽与游离氨基酸的比例仍存在争议。研究得出酪蛋白中2%-16%的苯丙氨酸、12%-19%的赖氨酸和约17%的蛋氨酸来自于血液中的小肽,而亮氨酸和缬氨酸基本不由小肽供应。小肽与游离氨基酸可以以不同的载体被转运进入乳腺组织利用,小肽在PepT2的作用下,被完整的转运进入乳腺组织,游离氨基酸通过氨基酸载体被转运进入乳腺组织,某些不同的氨基酸可以利用相同的载体进入细胞,这些氨基酸之间存在相互竞争的关系,因此,小肽的添加可以缓解游离氨基酸通道的竞争作用,使乳腺组织获得更多的氨基酸。本研究采用体外乳腺组织外植体培养方法,研究在胞外环境中含有全部必须氨基酸条件下,Met-Met/Arg-His-Ile分别以不同比例(0%、5%、10%、15%、20%、40%、60%、80%、100%)替代游离氨基酸,对乳蛋白合成的影响及肽转运的机制。共有9个处理组,每个处理用三头牛重复。正常培养基处理体外培养的乳腺组织外植体48h,用不含有氨基酸的培养基饥饿外植体24h,再用处理培养基培养外植体48h,培养完毕后利用RT-PCR和Western-Blot测定酪蛋白、氨肽酶、PepT2的mRNA和蛋白水平表达。确定酪蛋白表达水平最高时,小肽(Met-Met/Arg-His-Ile)与游离氨基酸的最佳比例。本研究结果:(1)Met-Met显著促进了体外培养的乳腺组织中酪蛋白的基因表达和蛋白表达(P<0.05),但是,Arg-His-Ile虽然有提高体外培养的乳腺组织中酪蛋白的基因表达和蛋白表达的趋势,但是差异不显著(P>0.05)。(2)游离蛋氨酸: Met-Met=80-85:20-15,酪蛋白表达出现高峰,再增加Met-Met的比例,酪蛋白的基因表达和蛋白表达出现下降趋势。(3)Met-Met/Arg-His-Ile促进了体外培养的乳腺组织中肽转运载体2(P<0.05)的表达。表明(1)Met-Met可以作为酪蛋白合成的前体被乳腺组织利用,Arg-His-Ile没能提高体外培养的乳腺组织中酪蛋白的表达,可能乳腺组织不能利用Arg-His-Ile。(2)游离蛋氨酸: Met-Met=80-85:20-15为乳腺组织的酪蛋白合成的最佳比值,当Met-Met占总蛋氨酸的15%-20%时,乳腺能达到最大的生产性能。(3)奶牛乳腺的循环肽在PepT2的作用下,被整体转运进入乳腺组织。
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