转基因动物乳腺生物反应器是近年来发展起来的一种在转基因动物乳腺中生产生物活性物质的高新技术，其核心是通过各种转基因技术，将乳腺组织特异性启动子驱动的外源基因在动物乳腺组织中高效表达，在乳汁中生产目的产品。奶山羊由于其妊娠周期短、产奶量高、对疾病的抵抗力较高等优点使之成为制备转基因动物乳腺生物反应器的理想动物。β-乳球蛋白(β-lactoglobulin，BLG)是反刍动物乳中含量最高的乳清蛋白，其调控元件已被用于乳腺特异表达载体的构建。基于普通质粒的表达载体的容量有限而乳蛋白基因的调控序列一般分散在基因的5′、3′端非常远的距离和内含子中，因此载体构建通常是将乳蛋白基因的一些调控元件人为地拼凑在一起而缺少调控元件之间的一些序列，这些序列很可能也对表达起调控作用．因此，将奶山羊BLG的整个基因座包括所有调控序列和目的蛋白基因装配到大容量载体中进行转基因动物的制备，成为除基因打靶方法之外的另一种使外源基因在动物乳腺中不受位置效应的影响而高效表达的转基因动物乳腺生物反应器制备方法。为获得奶山羊BLG的完整基因座，需要制作奶山羊基因组文库，然后对文库进行筛选得到目的克隆。BAC由于容量大、转化效率高、嵌合体少、易操作易回收、在宿主细胞中插入片段稳定性好等特点而成为真核细胞生物核基因组大片段插入文库制备的良好载体。基因组文库不仅可以应用于目的基因的获得，还可应用于物理图谱的构建、基因功能结构和表达的研究、定位克隆，长距离DNA测序和锚定、鉴定假定的顺式调节元件以及比较基因组学的研究等。本试验从萨能奶山羊静脉血中提取白细胞，然后将白细胞包埋进低熔点琼脂糖凝胶中。基因组通过HindⅢ部分酶切消化之后，通过CHEF凝胶电泳技术对大片段DNA进行两次选择，使片段大小更集中。合适大小的DNA片段通过电洗脱方法回收，减少了对DNA的损伤。pIndigoBAC-5载体用HindⅢ酶切和HK磷酸酶进行脱磷处理。大片段DNA和处理好的BAC载体按摩尔比1：10连接之后通过透析对连接产物进行脱盐和浓缩处理，处理后的连接产物通过电击方法转化感受态大肠杆菌DH10B。DH10B经过复苏之后涂布于含有氯霉素、IPTG、X-gal的LB平板培养基上，挑选白色克隆组建文库。所构建的萨能奶山羊核基因组BAC文库，插入片段大小25～140kb，平均大小78kb．覆盖基因组1.33倍．根据GenBank中的山羊BLG基因序列(Z33881)设计了两组引物，应用PCR方法筛选部分文库获得了2个包含有完整BLG序列的阳性克隆，插入片段大小分别为60、82kb，远远大于已报道的BLG调控区，适合于大容量载体为基础的乳腺特意表达载体的构建．本研究确定了高分子质量DNA获得的方法，优化了基因组部分酶切的条件，建立了高效的连接及转化体系，建立了一套适合于本实验室的BAC文库构建体系，并且筛选出了BLG基因位点的阳性克隆，为以后的工作奠定了基础．