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本研究利用屠宰场采集的母猪卵巢，用机械法从卵巢表面直径为3～6mm的卵泡中分离紧密包裹三层以上卵丘细胞的卵丘—卵母细胞复合体（COC），用于猪卵巢卵母钼胞体外成熟、体外受精及早期胚胎（体外受精卵）体外培养的研究。主要结果如下： 1．卵母细胞的体外成熟 采用微滴培养，卵丘—卵母细胞复合体体外培养42～44h后（38.8℃，5％CaO2，100％相对湿度），卵丘细胞扩展，部分卵母细胞排出第一极体。mTCM199+15％NCS（v／v）和NCSU23+10％PFF（v／v）为基础培养液用于卵母细胞体外成熟培养，在添加15iu／ml的PMSG和HCG时，卵母细胞体外培养成熟率分别为41.2±3.98％和38.28±4.02％；在添加20iu／mlPMSG和HCG时，卵母细胞体外培养成熟率为44.8±5.34％和39.12±1.25％，在添加相同浓度的激素时mTCM199+5％NCS（v／v）和NCSU23+10％PFF（v／v）对卵母细胞成熟率的影响差异不显著（P>0.05）。mTCM199+15iu／ml PMSG—15iu／ml HCG添加浓度为0，10％，15％，20％的血清（NCS）体外培养卵母细胞，卵母细胞成熟率分别为0，37.78±1.92％，43.33±2.72％，43.33±3.85％，添加组与不添加组之间差异极显著（P<0.01）：添加10％与20％组之间差异显著（P<0.05）；添加15％与20％组之间差异不显著（P>0.05）；添加10％与15％组之间差异显著（P<0.05）。在mTCM199+15％NCS（v／v）中共同添加0iu／ml、10iu／ml、15iu／ml、20iu／ml的相同剂量PMSG和HCG进行体外培养时，卵母细胞的成熟率分别为0，35.56±1.92％，41.2±3.98％，46.27±7.36％，添加组与未添加组之间差异极显著（P<0.01），添加15iu／ml组与20iu／ml组之间的差异不显著（P>0.05），添加15iu／ml组与添加10iu／ml组之间差异不显著（P>0.05），添加20iu／ml组与添加10iu／ml组之间差异显著（P<0.05）。添加一定浓度的血清、激素有利于提高卵母细胞体外成熟率。 2．体外受精 将鲜精（或常温保存精液）在mTBM+100ug／ml肝素中运用“上游法”获能40～60min，然后将获能看的精子与成熟卵母细胞在mTBM-50 u g／。1肝素中共孵育6h （3．4aC，5％CO。，100％相对湿度）。受精后 24～28h有部 分受精卵排出第二极体，部分受精卵发生卵裂，总卵裂率为盯．9弧（“～50h观 察统计）。 3．早期胚胎的体外培养 体外受精后，三种培养体系被用于受精卵 的体外培养：1．TCM199＋15％NCS，11．输卵管上皮细胞＋TCM199＋15％NCS共培养系 统，fll．颗粒／卵丘细胞＋TCM199＋15％＼CS共培养系统，培养条件为38．S”C， 5 ％ CO。，100％相对湿度。三种培养体系中早期胚胎发育率分别为 38．49士6．59％；37．19IS．19％，37．85土4．25％（48～50h观察统计），三种培养体系 对早期胚胎发育率的影响差异不显著（P＞0．05）。在1中，胚胎发育到4细胞后便 不再向前发育，在＊和＊中，部分胚胎能越过 4细胞期发育到 8～16细胞期及至 桑檀胚期。桑堪胚发育率分别为（，12．84土6．04％，4．76土6．73％），11组与1组 间差异极显著中＜O．N)，H组与＊I组间差异显著沪＜O．“)，HI组与I组间无显 著差异（P＞0．05）． 总之，在本实验条件下，猪卵巢卵母细胞在体外条件下能够发育成熟，成熟 卵母细胞与体外获能的精子能进行体外受精发生卵裂，发育成胚胎；通过共培养 体系培养，早期胚胎能突破4细胞发育阻滞，发育到桑堪胚。