目的观察KM小鼠大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注后脑组织梗死体积的改变以及缺血中心区及周边区脑组织细胞的变化;探讨KM小鼠大脑中动脉缺血再灌注后缺血中心区及周边区星形胶质细胞(AS)形态及表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的情况;研究KM小鼠大脑中动脉缺血再灌注后缺血中心区及周边区AS表达EAAT-2、ICAM-1和NF-κB P65的变化,探讨局灶性脑缺血再灌注后缺血中心区及周边区星形胶质细胞表达谷氨酸转运体及炎症介质的情况。方法1选取成年健康雄性KM小鼠,采用线栓法制作右侧大脑中动脉缺血2 h再灌注1h、4h、10h、24h、48h、72h模型,归为缺血再灌注组(CIR)(n=9);同时仅结扎右侧颈总动脉制作假手术1h、4h、10h、24h、48h、72h对照和不进行任何处理的正常对照,分别归为假手术组(n=6)和正常组(n=9)。2取正常组和脑缺血再灌注模型组各时间点小鼠各3只,使用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,观察不同CIR时间后脑缺血部位及体积改变。3其余小鼠处死后用多聚甲醛进行心脏灌注,取脑切取右侧缺血中心区、周边区及左侧相应区域,石蜡包埋后连续切片。4将正常组及缺血再灌注模型组脑组织石蜡切片采用苏木素-伊红(HE)染色法染色了解CIR后右侧缺血中心区及周边区在CIR各时间点的细胞形态变化。5将各组脑组织石蜡切片免疫组化法观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。6将正常组、缺血再灌注组及假手术组脑组织石蜡切片应用免疫组织荧光标记法在荧光显微镜下观察右侧缺血中心区及周边区AS表达谷氨酸转运体2(EAAT-2)、核转录因子P65(NF-κB P65)、细胞粘附因子1(ICAM-1)的改变。7统计学方法:实验数据应用SPSS 21.0统计软件进行各种统计学分析,实验数据中计量资料以(?)表示,组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1脑缺血再灌注模型组小鼠在不同观察时间后出现不同程度的神经功能缺损,假手术组在饲养指定时间后未出现神经功能缺损。2小鼠脑缺血再灌注TTC结果显示再灌注1h开始出现脑梗死灶,且再灌注24h时梗死体积最大,之后逐渐缩小(F=745.534,P=0.000);3 HE染色结果显示脑缺血再灌注后右侧缺血中心区细胞肿胀、肥大后较快发生死亡;右侧缺血周边区细胞肿胀随再灌注时间延长不断加重,最终走向胀亡。4免疫组织化学法结果显示右侧缺血中心区AS肿胀、肥大进而较快发生死亡,GFAP表达水平比右侧缺血周边区较低,CIR 4h、10h、24h、48h组与正常组比较均有显著性差异(P<0.05);右侧缺血周边区GFAP阳性表达的AS出现反应性活化,进而发生形态学改变,表达量显著增多,除CIR 1h组,余组与正常组相比均有显著性差异(P<0.05)。5 GFAP和EAAT-2免疫荧光标记结果显示,右侧缺血中心区的GFAP和EAAT-2共定位细胞于CIR 24h表达至高峰(P<0.05);右侧缺血周边区于再灌注72h后GFAP和EAAT-2共定位细胞较CIR48h有所减少,且EAAT-2主要位于AS上。6 GFAP和ICAM-1免疫荧光标记结果显示,右侧缺血中心区于CIR 24h的ICAM-1和GFAP表达共定位细胞略增加,但仅有小部分ICAM-1位于星形AS上,随后表达逐渐减少;右侧缺血周边区至CIR 48h时ICAM-1和GFAP表达共存细胞数量小幅度增多后递减(P<0.05)。7GFAP和NF-κB P65免疫荧光标记结果显示,仅有小部分NF-κB P65位于AS上。右侧缺血中心及周边均于CIR 4h可见GFAP和NF-κB P65共存细胞,两区域均于CIR 24h表达增加后减少,且右侧缺血周边区略多于缺血中心区。结论小鼠大脑中动脉缺血再灌注可造成缺血中心区及其周边区的神经细胞损伤,且缺血中心区更为严重;AS有较强的耐受力与应激能力,可通过表达EAAT-2吸收Glu以减轻兴奋性毒性发挥细胞保护作用;同时也会释放NF-κB P65、ICAM-1等炎性因子对细胞产生损伤,并促进炎性级联反应。这可能是一种CIR后的全脑保护性防御机制,尤其是在缺血周边区,其活化程度影响着脑组织细胞的存活与修复,提示在CIR过程中,AS反应性活化在脑损伤后可塑性形态及功能改变中发挥重要作用。因此,尽早溶栓恢复脑组织的再灌注将可能挽救缺血周边区部分可逆细胞,同时抑制其神经损伤作用,对促进善脑神经功能的恢复具有重要的意义。