猪GPAT基因克隆、变异和表达规律分析

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:mrchangmeng
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肌苷酸(inosinc acid,inosinc mophosphate,IMP),又名次黄嘿呤核苷酸,是ATP代谢的中间产物,存在于肌肉中。研究表明肌苷酸是畜禽肉中重要的鲜味物质,其增加鲜味的能力比谷氨酸钠强40倍,目前国际上已经把肌苷酸含量作为衡量肉质鲜味的一项重要指标。谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸酰胺转移酶(Glutamine phosphoribosylpyrophosphate amidotransferase, GPAT)是催化次黄嘌呤核苷酸合成过程的一种限速酶,催化次黄喋呤核苷酸合成的第一步反应。因此,GPAT是影响肌苷酸生成、决定肉质性状的候选基因。为了进一步探索GPAT基因与肉质、风味性状的关系,本研究采用PCR-SSCP方法分析其遗传多态性、采用real timePCR方法分析其组织表达规律。得到的主要结果如下:1)利用RT-PCR方法成功克隆了民猪GPAT基因的完整编码区序列,长2481bp,预期编码826个氨基酸,在多肽链存在一个LPLAT_DHAPAT-like结构和一个PlsB结构;2)通过PCR-SSCP方法在外显子1和14中寻找到了3个单核苷酸多态位点,分别是c.151T>C,c.171G>T和c.1937G>T,其中c.151T>C和c.1937G>T是错义突变,分别导致了蛋白质多肽链p.Phe51Leu、p.Leu646Arg的替代。群体遗传学分析表明,各等位基因在民猪、大白、长白、杜洛克、北京黑猪和野家杂交猪中的分布存在着极显著的差异(p<0.01);3) Real time PCR分析发现GPAT基因在肝脏、大肠、卵巢、脾脏、肾脏、小肠、肺、心脏、腿肌、背肌、子宫等组织中均表达,且肝脏中表达量最高,子宫中表达量最低。
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