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目的：通过建立真皮下毛细血管网皮片移植模型，建立骨髓间充质干细胞(BMSCs)培养的方法，观察自体骨髓间充质干细胞促进真皮下毛细血管网皮片的存活影响。 方法： 1、猪BMSCs原代培养、传代、纯化。将小猪腹腔麻醉后，无菌抽取骨髓，通过梯度离心法分离，获得骨髓间充质干细胞，接种于含有培养液的培养瓶中进行培养。3d后除去非贴壁细胞，观察细胞形态及生长情况，待细胞铺满后进行传代。取3代后的细胞备用。 2、BMSCs的CM-DiI标记。取第三代BMSCs，进行DiI荧光标记，将标记后的BMSCs消化重悬，调节浓度备用。 3、真皮下毛细血管网皮片移植动物模型的建立。将小猪麻醉后，在背部两侧分别移植自体的真皮下毛细血管网皮片，一侧注射盐水，一侧注射标记过DiI荧光的BMSCs。术后两周观察皮片中荧光细胞的表达、皮片存活的面积及病理变化。 结果： 1、MSC体外分离、培养、纯化及形态观察。倒置相差显微镜下观察刚接种的骨髓中体积较大的单核细胞呈球形，悬浮于培养液中。48 h少数细胞呈成纤维细胞样外形，以后细胞呈克隆样生长。3～4 d开始迅速生长，待细胞达到单层汇合的80％～90%，细胞呈比较均一的梭形，成纤维样细胞样生长，形成旋涡状。 2、 BMSCs的CM-DiI标记。CM-DiI荧光染料染色后细胞大部分着色，染色后的细胞继续培养后，保持良好的细胞形态。 3、真皮下毛细血管网皮片移植动物模型的建立。两周后观察到MSC组较盐水组存活较好，大部分存活，存活面积也较大。快速冰冻切片观察，MSC组发现切片中具有大量红色荧光细胞，注射点有更多荧光细胞聚集，血管内皮细胞出现红色荧光，皮片组织病理学观察，MSC组血管增生明显，数量较多，多于盐水组。 结论： 1、密度梯度离心法和贴壁筛选法相结合来分离培养骨髓间充质干细胞的方法较为简单方便； 2、骨髓间充质干细胞能够提高真皮下毛细血管网皮片的存活面积； 3、骨髓间充质干细胞能够促进真皮下毛细血管网皮片的血管化； 4、骨髓间充质干细胞可能会在真皮下毛细血管网的皮片中转化为血管内皮细胞。