苗药结石草保肝排石利胆作用与化学成分研究

来源 :江西中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ttjjgogogo
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目的:本课题运用经典的肝损伤、胆固醇结石和利胆模型,分别考察结石草(Incarvillea arguta Royle)在保肝、排石、利胆等方面的作用;通过UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术对结石草中的化学组分进行定性分析。方法:(1)采用灌胃ANIT(60 mg·kg-1)橄榄油溶液造成小鼠急性肝损伤模型的方法,研究了结石草总提物及总生物碱部位的保肝作用,检测血清中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),总胆汁酸(TBA),总胆红素(TBIL)和游离胆红素(DBIL)的含量;检测肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽(GSH)的含量,RT-PCR检测肝组织中FXR,CYP7A1,BSEP,MRP2 mRNA的表达量,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;(2)采用高脂饲料喂养小鼠造成胆固醇结石模型,研究结石草的排石作用,检测血清中总胆固醇(TC),高密度脂蛋白(HDL-C),低密度脂蛋白(LDL-C),甘油三酯(TG)的水平,并测量LXR-α、SRBI mRNA相对表达量。(3)采用正常大鼠胆总管引流的方法,研究结石草利胆作用,测定胆汁中TBIL、TC、TBA水平,并测量LXR-α、BSEP、MRP2 mRNA的相对表达量;(4)对结石草进行成分鉴定,采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS,YMC-ULtraHT Pro C18色谱柱(100mm×3 mm,2μm)以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱;质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正离子模式下采集数据,通过保留时间、精确分子离子峰和二级质谱裂解碎片。流速0.4 mL·min-1,柱温37℃,检测波长254 nm。结果:(1)结石草各剂量组均可显著降低肝脏血清中ALT,AST,ALP,TBA,TBIL,DBIL水平,显著升高小鼠肝匀浆中SOD和GSH的含量,同时降低MDA水平,结石草各组均能显著升高肝组织中FXR,MRP2 mRNA相对表达量,且高剂量组可显著升高BSEP mRNA相对表达量,并能显著降低CYP7A1的mRNA相对表达量。病理切片显示结石草各组能显著改善肝组织的病理变化。(2)结石草总提物高剂量组、总生物碱高剂量组能显著升高血清中HDL-C水平,并显著降低TC、TG水平,对LDL-C的水平没有显著影响,并能显著降低LXR-α、SRBI mRNA相对表达量。(3)与正常大鼠比较,结石草总提物高剂量组、生物碱部位高剂量组能显著增加正常大鼠胆汁流量,并能降低胆汁中TBIL、TC水平,但对TBA含量没有明显改变;总提物高剂量组MRP2、BSEP mRNA相对表达量显著升高,生物碱部位高剂量组大鼠肝组织中LXR-αmRNA相对表达量明显降低,BSEP mRNA的表达明显升高。(4)采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术初步鉴定了结石草中6个生物碱类成分,分别为O-methylcorypalline、N-methylcorydaldine、Boldine dimethyl ether、Lysicamine、Berbine、Piperine,2个黄酮类成分,分别为Quercetin、Luteolin。结论:结石草具有显著的保肝、排石、利胆作用,其保肝机制为增加胆汁酸的合成与转运;其排石机制为通过降低总胆固醇的含量,降低甘油三酯水平同时增加高密度脂蛋白的含量来降低胆固醇结石的生成率;其利胆机制为增加胆汁流量和改变胆汁成分;UHPLC-Q-TOF-MS/MS方法能快速鉴别结石草中的化学成分,简单,快速,为结石草的研究打下一定的基础。
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