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目的:探讨二仙汤质量分析方法,优化其提取工艺,研究二仙汤颗粒制剂工艺,优选大孔树脂对二仙汤有效部位群富集纯化工艺条件,小鼠体内抗氧化试验初步研究颗粒剂及有效部位群药效作用。
方法:1.化学法检识二仙汤主要有效成分,并建立紫外定量分析方法。以总黄酮、总皂苷、总生物碱及干膏收率为提取工艺的评价指标。索氏提取中,比较醇浓度对各指标影响,并设计乙醇回流法正交试验,得出最佳提取工艺。2.二仙汤经最优工艺提取、处理得稠膏,并与适宜的辅料及润湿剂混合制软材,挤压制粒,测出颗粒剂的临界相对湿度,检查颗粒剂粒度、水分等。薄层色谱(TLC)检识各药材。3.动态吸附解析法考察四种大孔树脂对二仙汤有效部位群的富集纯化效果,综合判断适宜纯化二仙汤的树脂。考察药液浓度、pH、NaCl盐浓度对各指标吸附效率的影响,优选上样条件,综合得出上柱量,考察解析阶段醇的浓度及用量,得富集纯化最优条件。4.以老龄小鼠为用药模型,分组灌胃给药,取血清及制备肝组织匀浆,测相应SOD、MDA和GSH值。
结果:1.验证了二仙汤总黄酮、总皂苷的紫外测定方法,建立了总生物碱的分析方法。最优工艺为,10倍量60%的乙醇提取3次,每次60min。2.颗粒制剂工艺为,稠膏加2倍量淀粉与适量85%乙醇混匀制软材,20目筛挤压制颗粒,颗粒剂临界相对湿度80%左右,各检查项目符合2005年药典规定,TLC法能检识各药材。3.四种树脂分离纯化二仙汤有相似性,D101型更适合。富集纯化条件是,二仙汤最优工艺提取,醇沉浓缩至药液比1:1.5,加NaCl调至1.5mol/L,4℃冷藏备用,取2.5倍柱体积(2.5BV)液上D101大孔树脂柱,6BV水洗弃去,5BV 50%乙醇洗脱部分干燥,得棕褐色粉末,即为有效部位群。4.与老龄对照B组相比,A组青龄小鼠SOD、GSH升高与MDA降低都有非常显著性差异(P<0.01),老龄用药各组(C、D、E)小鼠SOD、GSH升高均有显著性(p<0.05,或p<0.01),MDA下降也较显著(P<0.05),有效成分高剂量组各指标值已接近青龄小鼠水平。结论:总黄酮、总皂苷和总生物碱紫外分析法稳定可靠,为二仙汤质量控制标准制定了参考;颗粒剂制备简单可行;D101能较好除去二仙汤杂质,并使有效成分部位群得到富集纯化:二仙汤颗粒剂及有效部位群对老龄小鼠均有良好抗氧化防衰老作用。