猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenieritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis Virus of Swine,TGEV)引起一种高度接触性肠道传染病,它的主要症状是呕吐、腹泻和脱水,对我国的养猪业造成了很大的危害。本研究对实验室先前进行的流行病调查所检测到的疑似感染TGEV阳性粪样进行处理后,对TGEV敏感的ST细胞及PK15细胞进行攻毒,盲传10代后ST细胞产生病变,收集第10代的细胞液。同时参照GenBank数据库中收录的TGEV的TS株S基因B、C位点的序列设计一段特异性引物,对已产生病变的细胞液进行RT-PCR检测,经过电泳检测后发现了预期大小的TGEV S基因B、C位点的目的片段,测序后与GenBank数据库中S基因B、C位点序列核苷酸同源性达到99.6%,证明了成功分离并培养了TGEV,命名为TGEV-AYU株。利用GenBank上已公布的TGEV全基因序列设计17对特异性引物,以大量扩增的TGEV细胞液为模板,对AYU株进行RT-PCR扩增,对得到的17个cDNA片段经过克隆后送到生物公司进行测序、拼接,获得一个TGEV基因组全长的cDNA序列,与GenBank中已收录的其余的TGEV分离株序列进行比对后发现AYU株与Purdue P115株的序列同源性高达99.5%。TGEV-AYU株序列全长为28580bp,含有7个开放阅读框,将其提交GenBank收录,收录号为HM776941。TGEV全基因序列测定后可以对下一步即将进行的TGEV的感染性克隆奠定良好的基础。设计一段TGEV S基因D位点缺失序列的特异性引物,利用RT-PCR法扩增出的基因片段,克隆到原核表达载体pET-32a上,经酶切、测序鉴定后,再将重组表达质粒转化至大肠杆菌探查BL21中,用终浓度l mmol·L-1 IPTG诱导,表达产物以包涵体形式存在。超声波裂解菌体后对包涵体进行溶解,再用Ni-NTA柱对重组蛋白进行纯化,并对纯化的蛋白进行复性。S蛋白的表达为下一步蛋白功能基因组研究及ELISA检测方法的建立奠定了基础,另外可以为TGEV单克隆抗体的制备提供蛋白。