【摘 要】
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目的:本课题拟构建SUMO特异性蛋白酶1（SENP1）过表达腺病毒,感染至C57BL/6小鼠体内,探究高表达的SENP1能否介导PPARγ1K77位点发生去SUMO-1化,SENP1介导的PPARγ1K77去SUMO-1化对高糖高脂应激诱导小鼠整体和血管胰岛素抵抗的影响及其机制。方法:实验分组:（1）正常组（Ctrl）;（2）胰岛素抵抗组（IR）;（3）IR+空载病毒对照组（Vehicle）;（4
【基金项目】
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国家自然科学基金（PPARγ1SUMO化修饰在高（血）糖诱导血管内皮胰岛素抵抗中的作用及机制,No:81360060）
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目的:本课题拟构建SUMO特异性蛋白酶1（SENP1）过表达腺病毒,感染至C57BL/6小鼠体内,探究高表达的SENP1能否介导PPARγ1K77位点发生去SUMO-1化,SENP1介导的PPARγ1K77去SUMO-1化对高糖高脂应激诱导小鼠整体和血管胰岛素抵抗的影响及其机制。方法:实验分组:（1）正常组（Ctrl）;（2）胰岛素抵抗组（IR）;（3）IR+空载病毒对照组（Vehicle）;（4）IR+SENP1过表达腺病毒组（Ad-SENP1）。取体重约为15～20g C57BL/6小鼠,正常饲料喂养30天,除正常组（Ctrl）外其余全部换成高糖高脂饲料,继续喂养90天;Vehicle组通过尾静脉注射阴性空载腺病毒,Ad-SENP1组通过尾静脉注射Ad-SENP1过表达腺病毒,并继续喂养30天,期间观察并记录其身体参数。30天后,腹腔注射10%水合氯醛（按35-40ml/kg的给药量）麻醉小鼠,随后进行摘取眼球取血,最后静置并离心获得所需血清置于-80℃保存用于后续检测。对处死后的小鼠进行解剖,取其胸主动脉和腹主动脉进行后续实验。检测以下指标:（1）小鼠形态学参数指标如身长（Length）、体重（Weight）和Lee’s指数;（2）小鼠血胰岛素（FINS）、血甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TCH）等;（3）Western blotting法检测SENP1、免疫共沉淀法（Co-IP）检测PPARγ1SUMO-1化的水平;（4）血清中NO和AngⅡ含量水平;（5）血清中丙二醛（methane dicarboxylic aldehyde,MDA）含量水平和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）等活性;（6）Western blotting法检测IKK、IKK-pS176、免疫共沉淀法（Co-IP）检测IKK与PIAS1的相互作用;Western blotting法检测胰岛素信号通路PI3K/AKT/eNOS的表达水平。（7）Powerlab系统检测小鼠胸主动脉血管内皮依赖性血管舒张效应。结果:（1）PPARγ1K77去SUMO-1化能改善高糖高脂应激下小鼠整体和血管胰岛素抵抗的状态。感染腺病毒并高糖高脂诱导小鼠整体和血管IR,结果显示,与Vehicle组比较,Ad-SENP1组PPARγ1 SUMO-1化水平显著下调、NO水平显著上升（SENP1组与IR组相比上升71%）、AngⅡ水平显著下降（SENP1组与IR组相比下降89%）,表明SENP1过表达可使PPARγ1K77位点实现去SUMO-1化,并且PPARγ1K77去SUMO-1化可改善高糖高脂诱导的小鼠整体和血管IR。（2）PPARγ1K77去SUMO-1化逆转高糖高脂诱导的小鼠胰岛素抵抗的作用机制。Western blotting结果显示Ad-SENP1组IKK-pS176水平显著下调;免疫共沉淀结果显示,IKK与PIAS1的相互作用也随之减弱;Western blotting结果显示,PPARγ1K77去SUMO-1化可解除高糖高脂应激引起的PI3K/AKT/eNOS信号通路的抑制状态。结论:SENP1过表达可使PPARγ1K77位点实现去SUMO-1化;PPARγ1K77去SUMO-1化可逆转高糖高脂应激诱导的小鼠整体和血管胰岛素抵抗,其机制可能与IKK-pS176活性降低、IKK与PIAS1的相互作用减弱以及PI3K/Akt/eNOS信号通路抑制状态得到解除有关。
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