网柄细胞状黏菌(dictyostelid cellular slime molds,简称网柄菌)是一种特殊的真核生物,其基本结构单位是裸露、单核、单倍的黏变形体。作为重要的土壤微生物,主要生长在农田和森林的土壤及枯枝落叶中,以其中的细菌和其他微生物为食,有时也生长在动物粪便上。因其生命周期短暂且易重复,在实验室可以被分离得到,并完成生活史全阶段的观察,成为细胞学,遗传学,分子生物学等领域的理想实验材料。国内外学者虽已对部分地区网柄菌进行分类学研究,但仍有许多地区的网柄菌资源未被挖掘。网柄菌对不同细菌偏好性存在差异,然而,网柄菌与其生活环境中的哪些细菌有关联或者捕食哪类细菌研究甚少。因此探究网柄菌如何选择并适应土壤环境中细菌,对于明晰网柄菌的本质、分布规律及其与细菌的协同进化关系具有重要意义。本研究通过传统分离技术和分子生物学技术相结合的手段,对采集自俄罗斯远东地区萨哈林岛、乌苏里斯克和海参崴共计14份土壤样本中的网柄菌进行分类研究。此外,对长白山阔叶林、针叶林、针阔混交林和岳桦林4种不同林型下土壤细菌进行分离培养,根据16S r DNA序列初步鉴定至属级水平分类地位,并利用得到的的不同属细菌,分别单独和两两混合作为营养物,饲喂相同林型下土壤样品中分离得到的网柄菌(共14株),以网柄菌实验室常规培养所用营养大肠杆菌Escherichia coli作为阳性对照,无菌水为阴性对照,筛选长白山森林土壤中网柄菌的最适营养。并对其中2个林型中的3个网柄菌菌株(MR308,MR310,MR334)生活史3个重要发育阶段(集群、假原质团、孢堆果)进行共生细菌的16S扩增子测序,进一步探索网柄菌选择利用环境细菌的本质。得到的主要结果如下:1.共得到10个网柄菌菌株,隶属于2目3科4属7种。其中包含1个新种(多支异柄菌Heterostelium multibrachiatum sp.nov.),4个俄罗斯新记录种(簇生凯文德菌Cavenderia fasciculata、纤细异柄菌H.tenuissimum、长孢网柄菌Dictyostelium longosporum和巴塔哥尼亚轮柄菌Polysphondylium patagonicum)和2个常见种(金柄凯文德菌C.aureostipes和紫轮柄菌P.violaceum)。从相对较低海拔(-10 m-17.7 m)的土壤样本中分离得到3个网柄菌菌株,从相对较高海拔(52 m-185 m)的土壤样本中分离得到7个网柄菌菌株,相对较低的海拔可能不适合网柄菌生长。除新种多支异柄菌H.multibrachiatum是从接近中性和强酸性土壤中被分离得到之外,其余6个种均从中性和弱酸性土壤中被分离得到。因此网柄菌可能更适合在接近中性的土壤中生存。本研究中有3种网柄菌(巴塔哥尼亚轮柄菌P.patagonicum,簇生凯文德菌C.fasciculata和金柄凯文德菌C.aureostipes)在同纬度地区有过报道,并且巴塔哥尼亚轮柄菌P.patagonicum是世界范围内第二次报道。在对太平洋北部的萨哈林岛进行网柄菌资源调查时,共得到1个新种和2个俄罗斯新记录种。这是迄今为止第五次对岛屿生境的网柄菌进行报道,为岛屿上网柄菌的分布提供了新的研究进展。2.共分离得到芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙雷氏菌属(Serratia)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、微杆菌属(Microbacterium)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、黄单胞菌属(Stenotrophomonas)、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus)、红球菌属(Rhodococcus)共9个属的111株细菌。结果表明不同营养类型对网柄菌生长量影响差异显著,在长白山的针叶林、阔叶林、针阔混交林和岳桦林的土壤环境中,4种林型共有的可分离野生细菌芽孢杆菌属Bacillus和沙雷氏菌属Serratia,无论是作为单独营养还是与其它细菌混合,得到网柄菌生长量都处于优势水平,且优于网柄菌常规培养所用的大肠杆菌E.coli,是长白山森林土壤中网柄菌的最适营养。3.3个网柄菌菌株(MR308,MR310,MR334)分别注释到细菌OTU 234个、233个和237个。3个网柄菌携带的共生细菌种类不同,且3个网柄菌生活史的3个阶段共生细菌物种组成均不相同,但优势菌门均为变形菌门Proteobacteria,优势属为假单胞菌属Pseudomonas。除食物细菌外,网柄菌生活史不同阶段可以携带多种细菌,且大部分来自于其生长环境土壤中。