大鼠局灶性脑缺血再灌注过程中血流、NMDA受体、M受体及NO时空变化的实验研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leoni002
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研究背景和目的:局灶性脑缺血后脑组织损伤的过程相当复杂,包含了许多因素的共同作用。其中,血流、受体及一氧化氮(NO)的变化是损伤过程中的三个重要环节。局灶性脑缺血中,大脑中动脉是脑梗塞好发部位,因此,脑中动脉梗塞模型就成了标准的动物模型。另外,受体显像是核医学的一个主要研究方向,对正电子发射断层(PET)的开展尤其有用。现在已有人在多种脑部疾病的诊断中应用了受体显像。脑缺血后常由于溶栓等治疗作用产生再灌注现象。再灌注影响脑缺血及调整缺血后的改变。 本实验采用近年来较为常用的大鼠大脑中动脉线栓法造成局部缺血再灌注模型,研究了在此模型中不同缺血及再灌注时间过程中血流同组织学变化、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体、毒蕈碱乙酰胆碱受体(M受体)及NO的变化,目的是为了寻找出血流、NMDA受体、M受体和NO同脑缺血及再灌注过程的关系、变化规律及机理,为诊断、治疗和观察脑缺血疾病预后情况提供依据,并为研究其它脑部疾病或功能改变提供参考资料。 实验方法:实验动物采用Wistar大鼠,雌雄各半,体重250—300克。(1) 采用线栓法阻断大鼠大脑中动脉产生局灶性脑缺血再灌注模型;(2) 在在局灶性脑缺血再灌注损伤的实验研究中,采用冰冻切片柯紫染色法判定脑不同部位的病理改变,利用Zea longa评分标准判定实验动物的行为改变,脑水肿采用脑水含量的方式来表达;实验共分9组:假手术对照组(sham)、完全缺血2小时组(O2)、24小时(O24)、完全缺血2小时再灌注2小时(O2R2)、4小时(O2R24)、8小时(O2R8)、24小时(O2R24)、72小时(O2R72)、完全缺血4小时再灌注24小时(O4R24);(3) 在大鼠脑局灶性缺血再灌注过程中的血流及组织学改变研究中,采用99mTc-HMPAO放射性自显影的方法,利用CS-250分子成像分析系统、BI屏扫描来研究不同脑区的血流程度、面积及组织学上的变化。实验分为8组:假手术对照组(Sham)、完全缺血5分钟组(O5m)、完全缺血2小时(O2)、4小时组(O4)、完全缺血2小时再灌注15分钟组(O2R15m)、完全缺血2小时再灌注2(O2R2)、4(O2R4)、24(O2R24)小时组;(4) 在大鼠脑局灶性缺血再灌注过程中的脑NMDA受体、M受体变化研究中,分别采用3H-MK-801及3H-QNB作为放射性受体配体,利用宏观放射自显影、微观放射自显影、受体结合法在不同脑区进行受体密度、亲和力(Kd值)、最大结合容量(Bmax)的变化分析;实验分为9组,除完全缺血4小时再灌注24小组变为完全缺血4小时组外,其余各组同(1);(5) 在大鼠脑局灶性缺血再灌注过程中大脑皮层NO的变化研究中,以DETC的柠檬酸盐为NO的捕获剂,采用电子顺磁共振波谱仪(EPR)进行NO含量测定。实验共分8组:假手术对
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