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试验内容,AMOS-PCR是一种能够鉴别诊断布鲁氏菌病原的一种PCR方法,本试验中对其分型鉴定进行了研究。对我国常用疫苗S2、M5、S19、104M使用该方法,并做单一基因的AMOS-PCR来验证其在鉴别布鲁氏菌各种的特异性。对国内常用的布鲁氏菌疫苗S2、M5的一些功能基因进行克隆测序,并与已发表序列进行比对分析,这些基因有保护性抗原基因Omp31、Omp25、Omp2b、p39、L7/L12以及毒力因子四型分泌系统中的关键位点virb8基因。结果显示,(1)AMOS-PCR在鉴定布鲁氏菌病原上有着很好的效果,可区分布鲁氏菌各个种,四株布鲁氏菌S19,104M,M5,S2都得到了很好的鉴别诊断,同时单一基因的PCR也扩增出各自特异的条带,说明了这种方法在种间有着很好的特异性,无交叉反应。(2)扩增出了5个保护性抗原基因。得到其核酸序列,其中L7/L12测得大小为375bp序列;p39测得1207bp的序列;Omp2b测得1089bp的序列;Omp31测得723bp的序列;Omp25测得642bp的序列。序列分析表明,我国常用布鲁氏菌疫苗的这几种基因与国外菌株同源性极高。S2、M5与其他菌株相同基因有着很高的同源性,S2菌株5个基因与其他菌株的同源性在97.1%～100%;M5菌株5个基因与其他菌株的在95.1～100%。相比较而言布鲁氏菌Omp2b在这几株疫苗菌株中差异最显著。S2 Omp2b基因与其他菌株同源性为97.1～98%;M5 Omp2b基因与其他菌株的同源性为95%～97.1%。(3)对S19、104M、S2、JYS2、M5、TKM5、及一株由免疫羊体分离的菌株命名为41#菌株共7株毒力基因Virb8进行测序。测得Virb8基因长720bp,序列分析结果表明,该基因同源性极高,达到99.7%～100%。说明这个基因高度保守。