本研究利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法对两个突变体库一共1200份诱变小麦群体的Waxy蛋白变异进行了鉴定,并通过双向电泳(2D-PAGE)、基因克隆、原核表达的方法验证SDS-PAGE结果并解析Waxy基因变异机制及其对淀粉含量的影响。主要结果如下:1.从小麦EMS诱变群体中一共鉴定出3份Wx蛋白迁移率变化材料,其中2份材料M2-97-8,M2-104-2来自AS201642突变体库为Wx-B1突变体;1份材料M2-101-1来自蜀麦126突变体库为Wx-A1突变体。2.对三份突变体进行2D-PAGE检测,发现两份Wx-B1突变体等电点均发生了变化,而M2-101-1结果中存在2个亚基但等电点未发生变化。进一步,利用UREA-SDS-PAGE对M2-101-1再次进行分析,发现Waxy区域出现了2条带,证实Wx-A1迁移率发生变化,与Wx-D1重合,并且Wx-A1表达量有所降低。3.对突变体Wx-1 DNA克隆,M2-97-8和M2-104-2中Wx-B1全长序列为2793bp,M2-101-1中Wx-A1全长为2781bp的序列。序列分析发现,M2-97-8有两处突变G2002A和G2715A;M2-104-2一处突变G1860A,M2-101-1一处突变C1448T。cDNA克隆发现了相同的单碱基突变。氨基酸分析表明:M2-97-8的两处突变中,第580处甘氨酸被精氨酸取代,另一个为无意义突变;M2-104-2在第422处谷氨酸被赖氨酸取代;M2-101-1在第316处脯氨酸被亮氨酸取代。4.对突变的Wx-1基因进行原核表达分析,发现与预测结果相符,与种子中迁移率变化趋势一致,但表达的蛋白比种子中提取的对应蛋白迁移率更小。5.对突变材料籽粒淀粉组成测定发现M2-97-8和M2-104-2中的总淀粉和直链淀粉含量比对照(AS201642)高,M2-101-1中的总淀粉和直链淀粉含量比对照(蜀麦126)低,且均差异显著。在淀粉琼脂糖凝胶电泳中,也存在上述相同的直链淀粉含量差异。虽然在突变体中存在总淀粉和直链淀粉含量的差异,但无法确定其与突变体Wx-A1和Wx-B1之间的相关性。