乳腺癌是全球女性患病率最高的恶性肿瘤，患病人数庞大并呈持续增涨态势，严重威胁女性的健康和生活质量。目前，手术和放化疗仍是乳腺癌治疗的主要手段，但是这些方法都各有弊端，难以达到治愈的目的。随着分子生物学、细胞生物学及病毒学的发展，基因治疗已成为癌症治疗的新兴手段，其中腺病毒载体疗法表现出了巨大优势，有望成为乳腺癌治疗的可靠方式。　　本课题组运用RAPAd.Ⅰ腺病毒载体系统构建了重组腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A(Ad-VT)及对照病毒Ad-hTERTp-E1a(Ad-T)、Ad-Apoptin（Ad-VP3）、Ad-mock，该载体缺失腺病毒基因组骨架的左臂反向末端重复区(ITR)、包装信号及早期区1基因(E1)，最大程度地降低包装过程中野生型腺病毒的污染。病毒基因组中巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)启动子在上游驱动特异性抑瘤基因Apoptin，使病毒具有特异性溶瘤作用，hTERTp在下游驱动腺病毒5型早期区1A基因(early region1A，E1a)，使病毒能够特异性复制，这样重组腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1a具有了肿瘤特异性杀伤和肿瘤特异性复制的双特异性溶瘤作用。　　MTS实验、结晶紫染色实验检测Ad-VT对人乳腺癌MCF-7细胞、人正常乳腺上皮细胞MCF-10A的抑制作用，结果显示重组腺病毒Ad-VT对人乳腺癌MCF-7细胞具有明显特异性抑制作用，与Ad-mock组相比抑制作用显著增强(P＜0.05)，抑制作用具有时效和剂效关系，而重组腺病毒Ad-VT对人正常乳腺细胞MCF-10A不具有明显抑制作用;AO/EB染色实验、DAPI染色实验、AnnexinⅤ荧光检测及流式检测实验探讨重组腺病毒对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用方式，结果显示重组腺病毒Ad-VT、Ad-T、Ad-VP3对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用方式主要是凋亡，且抑制作用具有时效和量效关系;划痕实验、Transwell迁移及Transwell侵袭实验探究重组腺病毒对乳腺癌MCF-7细胞的迁移及侵袭能力的影响，结果显示经Ad-VT感染过的乳腺癌MCF-7细胞，其迁移及侵袭能力受到很大程度的抑制，与Ad-mock组相比差异显著（P＜0.05），且具有时效关系;建立乳腺癌MCF-7细胞裸鼠皮下种植瘤模型、静脉转移瘤模型，鼠乳腺癌4T1细胞BABL/c小鼠皮下种植瘤模型、静脉转移瘤模型，观察各重组腺病毒对各模型小鼠抗肿瘤治疗作用，结果显示双特异性溶瘤腺病毒Ad-VT能够明显延长裸鼠模型动物的生存期，抑制BABL/c小鼠皮下种植瘤及静脉转移瘤生长;综合各项实验结果，双特异性溶瘤腺病毒Ad-VT在体内外均具有显著抑制乳腺癌的作用，在治疗乳腺癌方面具有临床开发价值，本研究将为双特异性溶瘤腺病毒Ad-VT的临床应用提供理论基础。