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炎症反应是机体在受到外界损伤时所表现出的复杂防御机制,适度炎症对机体有利,但过度炎症反应会对机体造成不同程度的组织损伤,对人的身心健康造成威胁。军队人员训练演习中,常会遭受军事训练伤的困扰,表现为急性炎症和疼痛的特点,进而严重影响到军队战斗力,使用抗炎药物是对抗炎症反应的有效措施之一,但现有抗炎药物存在胃肠道损伤副反应或对心血管系统造成损伤,因此研发安全高效的新型抗炎药物仍具有重要现实意义。小分子多肽因其分子量小、安全性高、特异性强及结构易修饰等成为研发的目标之一,但也存在体内易被生物活性酶降解、半衰期短及膜通透性差的缺陷,从而限制了其进一步的研发与应用。本文以抗炎活性线性肽为研究对象,在保留药效的前提下,基于侧链修饰策略和订书肽改造策略,将其修饰改造为环肽和订书肽前体线形肽,以期提高其抗炎活性并获得构效关系规律,为进一步研发新型抗炎肽类药物奠定基础。本文取得如下工作进展:第一部分:环肽的合成。利用第三维保护基-光敏感保护基,将抗炎线性肽原型肽改造修饰为环肽。在本课题组前期光敏感保护基2-(邻硝基苯基)-乙基(Npp-OH)的研究基础上,在其苄基位点引入烷基或将伯醇改为仲醇,设计合成了四种新的光敏感保护基。经考察发现3-(邻硝基苯基)丁-2-醇(Npb-OH)对酸碱稳定、光解速率较快并可有效对抗二酮哌嗪副反应。进一步实验将其成功用于线性肽的氨基酸侧链修饰成功制得两条环肽,并发现该法具有光照定点脱除且不影响肽链其他活性基团的优势。第二部分:线性肽及订书肽前体线性肽的合成。首先以标准固相合成法合成了10条抗炎线性肽,基于订书肽策略,以此10条线性肽为原型肽修饰得订书肽前体线性肽。修饰策略为:设计合成具有两种构型α-双取代的丙烯基丙氨酸(疏水性氨基酸),用其替换抗炎线性肽肽链i~i+4位点的疏水性氨基酸残基,共制得19条新结构线性肽,以备进一步环合成订书肽。产物经HPLC分离制备和纯度检测,并经Q-FT-ICR-MS进行分子量确证。第三部分:对合成的31条环肽、线性肽及其订书肽前体线性肽进行抗炎活性评价。首先采用CCK-8法测定细胞活力,分别在20、10、5、2.5、1.25、0.625μmol/L浓度下,考察上述受试肽对RAW264.7细胞活力的影响,结果发现0.5μmol/L浓度的3条多肽LP11-26,MP11-26-R,R,MP11-26-S,S;1μmol/L浓度的3条多肽LP4-18,MP4-18-R,R,MP4-18-S,S;5μmol/L浓度的其余25条多肽均可使RAW264.7细胞活力维持在90%以上。由此确定了此三种浓度可作为对应多肽活性初筛的给药浓度。用酶联免疫吸附法(ELISA)评价31个受试肽对LPS诱导RAW264.7细胞释放TNF-α的影响,以地塞米松为阳性对照药。结果表明:与模型组相比,地塞米松及31个受试肽均可显示出抑制活性(P<0.05);改造所得订书肽前体线性肽与其相对应的线性肽原型肽相比,活性无显著性差异,表明此结构改造策略成功,对10条线性肽原型肽抑制RAW264.7细胞TNF-α释放的作用无明显影响;环肽抗炎活性高于对应的线性肽表明该环肽修饰策略可以提高线性肽的抗炎活性。进一步复筛结果显示:高浓度受试组对TNF-α抑制活性均高于低浓度组,提示可能存在剂量依赖性;MP5-8S,S在5、2.5μmol/L下显示对TNF-α抑制活性;2.5μmol/L的LP4-18对TNF-α抑制活性显著高于阳性对照药地塞米松;1μmol/L的LP11-26、MP11-26-R,R对TNF-α抑制活性与地塞米松组相当。体内抗炎活性评价表明:地塞米松组5mg/kg的肿胀抑制率为52.3%,有良好的肿胀抑制效果;多肽LP4-18、MP5-8S,S、LP11-26以及MP11-26R,R的肿胀抑制率分别为36.0%、24.0%、47.1%、29.7%,可显示出抑制效果;蜂毒肽LP11-26与地塞米松组相比,抑制率无统计学意义(p>0.05),表明其肿胀抑制率与地塞米松组相当。综上所述,本文合成了10条抗炎线性肽并以其为原型分子,通过环肽和订书肽策略,进行了结构修饰改造,成功合成了2条环肽以及19条可进一步环合成订书肽的前体线性肽,共制得31条多肽。通过RAW264.7细胞实验评价了所得多肽的抗炎活性,结果表明,环肽策略可显著提高抗炎活性;而订书肽策略改造所得前体线性肽对原线性肽的抗炎活性无明显影响,以上工作为进一步制备订书肽,进而研究稳定性好和成药性佳的抗炎活性肽奠定了理论与实验基础。