卵母细胞体外成熟过程中,核质成熟不同步的问题亟待解决,C型利钠肽（C-type natriuretic peptide,NPPC）作为内源性减数分裂抑制剂备受关注,在卵母细胞体外成熟过程中,激素和转化生长因子9（Growth Differentiation Factor,GDF9）是主要的促成熟因子。但是,关于激素和GDF9对绵羊卵泡中NPPC/NPR2的影响目前还不是很清楚。本实验研究了不同直径卵泡中NPPC和利钠肽受体2（Natriuretic peptide receptor2,NPR2）的表达模式,促卵泡激素（Follicle Stimulating Formone,FSH）和GDF9对颗粒细胞中NPPC/NPR2表达模式的影响,并进一步探究了不同激素对NPPC抑制绵羊卵母细胞减数分裂的影响。结果如下:1.不同直径卵泡中NPPC和NPR2的表达模式。利用RT-PCR检测了不同直径（小腔≤2mm、2mm<中腔≤6mm、大腔>6mm）卵泡壁层颗粒细胞（MGCs）和卵丘细胞（CCs）中NPPC及NPR2基因表达量,Western blot检测细胞中NPR2蛋白表达量。结果显示:在不同直径卵泡中,NPPC基因在中腔卵泡的MGCs和CCs表达显著高于小腔和大腔卵泡（P<0.05）,且在大腔卵泡CCs中未检测到NPPC基因表达;NPR2基因和蛋白在中腔卵泡的MGCs和CCs表达显著高于小腔和大腔卵泡（P<0.05）。2.FSH与GDF9对体外培养的MGCs和CCs中NPPC及NPR2表达的影响。与未培养的MGCs（对照组）相比,体外培养的MGCs中NPPC mRNA及蛋白水平极显著下降（P<0.01）;FSH在一定程度上可显著提高体外培养的MGCs中NPPC mRNA及蛋白水平（P<0.05）,但仍显著低于对照组（P<0.05）,GDF9可极显著提高FSH诱导的MGCs中NPPC mRNA及蛋白水平（P<0.01）。体外培养的MGCs中NPR2mRNA及蛋白水平显著下降（P<0.05）;FSH在一定程度上可显著提高MGCs中NPR2mRNA及蛋白表达水平（P<0.05）,但GDF9对FSH诱导的MGCs中NPR2 mRNA及蛋白表达无影响。与未培养的CCs（对照组）相比,体外培养的CCs中NPPC mRNA及蛋白水平极显著下降（P<0.01）;FSH可以极显著提高体外培养CCs中NPPC mRNA及蛋白水平（P<0.01）,而GDF9明显抑制了FSH的这种促进作用（P<0.05）。体外培养的CCs中NPR2 mRNA及蛋白表达水平显著上升（P<0.05）,FSH在在一定程度上可显著提高CCs中NPR2 mRNA及蛋白表达水平（P<0.05）,而GDF9显著降低CCs中NPR2 mRNA及蛋白表达水平（P<0.05）。3.激素对NPPC诱导的绵羊卵母细胞减数分裂阻滞的影响。以常规成熟液（对照组）、NPPC 200 n M液（阳性对照组）、NPPC（200 n M）+FSH（10、20、30 ug/m L）、NPPC（200 n M）+LH（10、50 ug/m L）和NPPC（200 n M）+E2（0.5、1 ug/m L）预孵育绵羊卵母细胞4h、6h、8h,经免疫荧光染色进行核相分析。结果发现,200 n M NPPC对减数分裂阻滞作用时间可持续6 h（P<0.05）,0.5和1 ug/m L E2可显著促进NPPC诱导的绵羊卵母细胞减数分裂阻滞（P<0.05）,而FSH和LH对NPPC诱导的绵羊卵母细胞减数分裂阻滞没有明显的互作效应。综上表明:NPPC与NPR2均在绵羊小腔卵泡开始表达,在小、中、大腔卵泡中的表达依次为先升高后降低趋势;体外培养的颗粒细胞实验中,FSH可促进MGCs和CCs中NPPC与NPR2 mRNA及蛋白的表达,GDF9能促进FSH诱导的MGCs中NPPC mRNA及蛋白的表达,但抑制FSH诱导的CCs中NPPC和NPR2 mRNA及蛋白的表达;E2可显著增强NPPC诱导的绵羊卵母细胞减数分裂阻滞。本研究结果为进一步阐明NPPC在体外成熟中的作用机制提供理论依据。