鼻咽癌中LMP1对miRNA-200家族及ZEB1调控作用研究

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目的:检测鼻咽癌中LMP1、miR-200家族,ZEB1和E-cadherin等因子表达,并探讨它们之间的调控关系,研究其参与NPC侵袭转移可能的相关分子机制,对控制和防治鼻咽癌具有重要意义。方法:1.免疫组织化学方法研究ZEB1、LMP1和E-cadherin在NPC组织和鼻咽炎性组织中蛋白表达水平,并分析三种蛋白表达的关联性2.使用pIRES2-Zs-Green1-LMP1质粒对鼻咽癌细胞株CNE1, CNE2进行转染,并使用实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-time PCR, qRT-PCR)技术及免疫印迹法(Western Blot,WB)检测转染pIRES2-Zs-Green1-LMPI质粒前、后LMP1表达情况。3. qRT-PCR法检测转染和非转染细胞株中miR-200家族、LMP1、ZEB1 和 E-cadherin mRNA 表达水平。WB 法研究 LMP1、ZEB1 和 E-cadherin蛋白在转染pIRES2-Zs-Green1-LMP1质粒前、后CNE1,CNE2细胞系中的表达水平。4.用SPSS 16.0软件做统计学分析,计量资料用均数±标准差(x±s)表示,用独立样本t检验(方差齐)或者校正t检验(方差不齐)来比较两组间差异,计数资料率的比较用Fisher确切概率法(总例数<40例),用Pearson相关分析或者Spearman等级相关分析做相关性分析。P<0.05差异有统计学意义。结果:1.免疫组化结果:LMP1、ZEB1及E-cadherin在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为53.8%、71.8%,20.5%,其中LMP1、ZEB1在鼻咽癌组织中的阳性率均明显高于鼻咽炎性组织,组间比较有显著差异(P<0.05)。分析NPC组织中LMP1与ZEB1和E-cadherin蛋白表达的关联性,结果显示:LMP1 和 ZEB1 的蛋白表达成正相关(r=0.563, p<0.05),与 E-cadherin的蛋白表达成负相关(r=-0.421, p<0.05),而ZEB1的表达与E-cadherin呈负相关(r=-0.387,p<0.05)。2.转染结果:转染后CNE1,CNE2 qRT-PCR及WB结果均表明LMP1表达有差异,说明转染成功。3.转染和非转染细胞株qRT-PCR检测检验结果:①LMP1、ZEB1 mRNA在转染pIRES2-Zs-Green1-LMP1质粒的CNE1和CNE2中的表达水平均高于相应非转染NPC细胞(均p <0.05); E-cadherin mRNA在转染组CNE1 和 CNE2 中表达均下调(均p<0.05)。②瞬转pIRES2-Zs-Green1-LMP1质粒的CNE1细胞中miR-200a,miR-200c和miR-141的表达水平低于对照组,其中miR-141下调明显;miR-200b的表达水平高于对照组,间差异均有统计学意义(均p<0.05)。③瞬转pIRES2-Zs-Green1-LMP1质粒的CNE2细胞中miR-200a、miR-200c和miR-141的表达水平均低于对照组,其中miR-141下调最明显,组间差异均有统计学意义(均p<0.05)。4.转染和非转染细胞株WB法检测检验结果:CNE1和CNE2细胞转染pIRES2-Zs-Green1-LMP1质粒后,LMP1与ZEB1的表达均上调,其中LMP1上调明显,E-cadherin的表达均下调,组间比较有显著差异(p<0.05)。结论:1.鼻咽癌组织中LMP1和ZEB1的蛋白表达成正相关,而ZEB1的表达与E-cadherin呈负相关。2.鼻咽癌细胞中LMP1可能通过诱导下调miR-200a的表达,上调转录因子ZEB1的表达,从而抑制E-cadherin表达,来促进NPC侵袭转移。
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