目的:　　 1.研究开发快速、灵敏、选择性强的磷酸化蛋白质检测方法;　　 2.为磷酸化蛋白质组学研究人员提供合适的染色方法。　　 方法:　　 1.利用Stains-All染料，对应用该染料的原始磷酸化蛋白质检测方法进行改进，考察影响染色效果的各个因素，包括染料浓度，染色液溶剂组成、染色时间等;增加显色步骤，提高染色灵敏度，建立简便、快速、灵敏、选择性强的检测方法。　　 2.采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分别分离标准蛋白、动物组织样品和磷酸酶处理前后的酪蛋白，将所得凝胶用3种磷酸化蛋白质检测方法分别进行染色，比较这些方法的选择性、灵敏度、线性范围等信息。　　 3.利用质谱技术进一步验证改进的Stains-All磷酸化蛋白质检测的专属性。　　 结果:　　 1.对原始的Stains-All磷酸化蛋白质检测方法即SA(Stains-All)法进行了改进，成功建立新型的磷酸化蛋白质检测方法即ISA(improved Stains-All)法，操作步骤如下:　　 (1)水洗:将电泳后的聚丙烯酰胺凝胶置于30％甲酰胺中水洗2次，每次20min，温和振摇;　　 (2)染色:将凝胶置于染色液(0.01％ Stains-All，30％甲酰胺，45 mM Tris-HCl，pH9.2)中染色20 min，温和振摇;　　 (3)显色:将凝胶置于显色液（1％ EDTA-2Na，30％乙醇）中显色l min。　　 2.通过3种方法（ISA法、SA法、Pro-Q Diamond法）的比较，显示ISA法的灵敏度达到0.5-1.0 ng，优于SA法，与Pro-Q Diamond法相当;选择性方面，实验结果显示ISA法对磷酸化蛋白质有良好的选择性;　　 3.通过质谱技术在小鼠心肌等动物组织的凝胶上检测到了25个磷酸化蛋白质、27个磷酸化位点，进一步证明了ISA法对磷酸化蛋白质检测的专属性。　　 结论:　　 ISA法具有操作简便、快速、选择性强、灵敏度高的优点，灵敏度达到0.5-1.0 ng，操作时间仅需60 min，并对磷酸化蛋白质表现出了良好的选择性，适用于当前的磷酸化蛋白质组学研究。