失眠,中医又称为“不寐”、“不得眠”、“不得卧”、“目不瞑”等,是以经常不能获得正常睡眠为特征的一类病症,主要表现为睡眠时间、深度的不足,轻者入寐困难,或寐而易醒,或醒后不能再寐,重则彻夜不寐,常影响人们正常的工作、生活、学习和健康。目前西药常用催眠剂与安定剂,可产生即时疗效,但药物的毒副作用明显,且长期服药会使病人对药物的耐受性增加,并产生对药物的依赖性。祖国医学在失眠治疗上积累了丰富的经验,中药以其副作用小也显示出明显的优势。因此,加强中医药的开发利用,研究出具有自主知识产权的有效中药制剂是当务之急。多年来,导师陈群教授在中医理论指导下,总结前人宝贵经验,结合失眠病因病机,在长期的临床实践中拟定出治疗失眠的基础方剂-安寐汤,取得良好的临床疗效。安寐汤组成为：夜交藤、酸枣仁、生龙骨、珍珠母、五味子、白芍、生地。安寐汤方中夜交藤药性平和,功擅引阳入阴；生龙骨、珍珠母含钙、铁、钠、钾等微量元素,可抑制神经与骨骼肌兴奋,作用于REM时期,对失眠伴有多梦、惊悸、遗精、盗汗效好。五味子含五味子素、五仁醇,与白芍均对中枢神经系统有抑制、镇静作用。酸枣仁对实验动物和人均有显著而温和的催眠、镇静、安定效果,为治疗虚烦不得眠的要药。酸枣仁与夜交藤两药,为无论古代医家还是现代中医治疗失眠使用最多的药物,也是安寐汤的君药。通过对该方的分析可知,安寐汤药味精炼、组方巧妙合理,治标当中兼顾治本,本方可治疗各种失眠,具有宁神安寐、诱导睡眠的作用。为进一步探讨安寐汤的疗效和作用机理,我们进行了安寐汤的实验研究,研究结果可为安寐汤的进一步开发研究提供依据,为今后研制出疗效确切、使用简便的中药制剂奠定基础。第一部分文献综述与分析文献综述了失眠的古今论治、中西医药物治疗失眠的概况及失眠机理研究进展等三大方面的内容。祖国医学对不寐病证的认识己有两千多年的历史,历代医家积累了极其丰富的认识和治疗经验,创立了不少行之有效的治法和方药,为我们治疗失眠留下了极为宝贵和丰富的文献资料。通过对文献综述分析的结果,我们认为失眠是一种典型的生物、心理、社会等多种因素作用而致的疾病,可引起人体多系统、多层次的病理反应,因而单一作用、靶点明确的药物治疗不可避免地具有一些缺点,而多层次、多靶点的中医中药疗法更具优势。第二部分实验研究(一)安寐汤对小鼠一般行为学的影响研究目的：观察安寐汤对小鼠自主活动及日常行为的影响,探讨安寐汤的镇静作用效果。研究方法：小鼠灌胃给药15天后,采用旷野法记数2分钟内的行走格数和前肢向上抬举次数,结果进行统计分析。观察比较各组小鼠给药前后进食、饮水、排便、毛色及自主活动等一般情况的差异。研究结果：给药前各组小鼠的进食、饮水、排便、毛色及自主活动等方面均无明显差异。给药一段时间后,安寐汤给药组小鼠白天自主活动明显减少,体重增加较为明显,在白天睡眠时不容易被打扰。与正常对照组相比,安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组和七叶神安片对照组能显著降低小鼠2分钟内活动次数(P<0.05)安寐汤中剂量组分别与安寐汤低剂量组、安寐汤高剂量组、七叶神安片对照组比较差异明显(P<0.05),降低小鼠2分钟内活动次数作用最强。安寐汤高剂量组对老鼠2分钟内活动次数的影响存在性别差异(P<0.05),雌老鼠2分钟内活动次数要高于雄老鼠。其余各组尚不能认为存在组内性别差异(P>0.05)。与正常对照组相比,安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组能显著降低小鼠2分钟内上举前肢的次数(P<0.05)。安寐汤中剂量组分别与安寐汤低剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组、七叶神安片对照组比较差异明显(P<0.05),对降低小鼠2分钟内上举前肢的次数作用最强。七叶神安片对照组对降低小鼠2分钟内上举前肢次数作用不显著(P>0.05)。(二)安寐汤对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响研究目的：观察安寐汤对阈上剂量戊巴比妥钠的协同作用,探讨安寐汤促睡眠药效作用。研究方法：小鼠灌胃给药15天后,腹腔注射阈上剂量戊巴比妥钠,记录各组入睡潜伏期和睡眠维持时间,结果进行统计学处理。研究结果：与正常对照组相比,安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组和七叶神安片对照组能显著降低小鼠入睡潜伏期(P<0.05)。安寐汤中剂量组与安定对照组差异明显(P<0.05),安寐汤中剂量组对降低小鼠入睡潜伏期作用更强。安定对照组对老鼠入睡潜伏时间的影响存在性别差异(P<0.05),雌老鼠入睡潜伏期短于雄老鼠。其余各组尚不能认为存在组内性别差异。与正常对照组相比,安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安定对照组能显著延长小鼠睡眠维持时间(P<0.05)。安寐汤高剂量组对小鼠睡眠维持时间作用不显著(P>0.05)。七叶神安片对照组对小鼠睡眠维持时间作用不显著(P>0.05)(三)安寐汤对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠的影响研究目的：观察安寐汤对阈下剂量戊巴比妥钠的协同作用,探讨安寐汤促睡眠药效作用。研究方法：小鼠灌胃给药15天后,腹腔注射阈下剂量戊巴比妥钠,记录各给药组入睡率,结果进行统计学处理。研究结果：正常对照组睡眠小鼠的数量为1只,发生率为8.3%；安寐汤低剂量组睡眠小鼠的数量为2只,发生率为16.7%；安寐汤中剂量组为8只,66.7%；安寐汤高剂量组为6只,50%；安定对照组为4只,33.33%；七叶神安片对照组为4只,33.33%。安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组、七叶神安片对照组分别与正常对照组比较有统计学意义(P<0.05),安寐汤中剂量组,安寐汤高剂量组,安定对照组,七叶神安片对照组小鼠睡眠发生率明显高于正常对照组。(四)安寐汤对抗士的宁致小鼠惊厥的作用研究研究目的：探讨安寐汤对小鼠的抗惊厥作用。研究方法：小鼠灌胃给药15天后,腹腔注射硝酸士的宁,记录小鼠惊厥数。结果进行统计学分析。研究结果：正常对照组发生惊厥小鼠的数量为12只,发生率为100%；安寐汤低剂量组睡眠小鼠的数量为8只,发生率为66.7%；安寐汤中剂量组为3只,25.0%；安寐汤高剂量组为2只,16.7%；安定对照组为1只,8.3%；七叶神安片对照组为8只,66.7%。安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组、七叶神安片对照组分别与正常对照组比较有统计学意义(P<0.05),安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组、七叶神安片对照组小鼠惊厥发生率明显低于正常对照组。(五)安寐汤对失眠大鼠脑内中枢神经递质的影响研究目的：检测安寐汤对失眠大鼠脑内5-HT、5-HIAA、NE、DA的含量的影响,探讨安寐汤改善失眠作用机制。研究方法：实验用PCPA造成失眠大鼠模型,采用高效液相-电化学检测法检测失眠大鼠脑内5-HT、5-HIAA、NE、DA的含量变化。色谱条件为：色谱柱采用Phenomenex色谱柱(Luna C18,150×4.6mm,5μm); Alltech预柱(Alltima C185μm,Guard 7.5×4.6mm)。流动相采用乙腈：水相=13：87,用磷酸调水相的pH为4.0。流速为1.0ml／min。设定电压为+350mv。柱温为35℃。研究结果：空白对照组与空白模型对照组比较有差异(P<0.05),空白模型对照组大鼠脑内5-HT含量显著降低。与空白模型对照组相比,安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组均能提高失眠大鼠脑内5-HT含量,其中安寐汤高剂量组、安定对照组能显著提高失眠大鼠脑内5-HT含量(P<0.05)。各组雌雄老鼠脑内5-HT含量的疗效比较,P>0.05,尚不能认为存在组内性别差异。与空白对照组相比,空白模型对照组大鼠脑内5-HIAA含量显著降低(P<0.05)。与空白模型对照组相比,安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组均能提高失眠大鼠脑内5-HIAA含量,其中安寐汤高剂量组能显著提高失眠大鼠脑内5-HIAA含量(P<0.05)。安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组间差异不明显。各组雌雄老鼠脑内5-HIAA含量的疗效比较,P>0.05,尚不能认为存在组内性别差异。与空白对照组相比,空白模型对照组大鼠脑内NE含量有所升高。空白模型组大鼠脑内NE含量是较空白组有所增加,但两组相比无显著性差异。安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组可降低空白模型对照组大鼠脑内升高的NE含量,但作用不显著。安寐汤高剂量组对失眠大鼠脑内NE含量的影响存在性别差异(P<0.05),雌老鼠脑内NE的含量低于雄老鼠。安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组间差异不明显。与空白对照组相比,空白模型对照组大鼠脑内DA含量显著升高(P<0.05)。与空白模型对照组相比,安寐汤低剂量组、安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组、安定对照组均能降低失眠大鼠脑内DA含量,其中安寐汤中剂量组、安寐汤高剂量组能显著降低失眠大鼠脑内DA含量(P<0.05)。第三部分研究结论1.安寐汤对小鼠自主活动影响效果显著,可显著降低小鼠的自主活动性,说明安寐汤镇静效果明显,镇静作用优于安定和七叶神安片。2.安寐汤对小鼠入睡潜伏期和睡眠时间影响效果显著,可显著缩短入睡潜伏期和延长睡眠时间,说明安寐汤催眠效果明显,催眠作用优于安定和七叶神安片。3.安寐汤在提高小鼠睡眠发生率的作用上优于安定对照组和七叶神安片对照组,在降低小鼠惊厥发生率的作用上优于七叶神安片对照组,但比安定对照组作用效果弱。4.安寐汤高、中、低不同剂量组之间的疗效对比结果表明,安寐汤各剂量组对小鼠自主活动影响效果以安寐汤中剂量组效果最为明显,对小鼠入睡潜伏期和睡眠时间影响效果以安寐汤低、中剂量组效果较为明显,对小鼠睡眠发生率作用以安寐汤中、高剂量组效果较为明显,对降低小鼠惊厥发生率作用以安寐汤中、高剂量组效果较为明显,提示中剂量可作为药物开发及临床用药的参考剂量。5.安寐汤对不同性别老鼠镇静作用、催眠作用差异均不明显,提示安寐汤作用无性别上的差异。6.通过对失眠大鼠脑内中枢神经递质含量的作用进行研究,我们发现安寐汤可以显著增加失眠大鼠脑内五羟色胺、五羟吲哚乙酸的含量,降低多巴胺的含量。安寐汤可能是通过增加五羟色胺、五羟吲哚乙酸的含量,降低多巴胺的含量而作用于睡眠—觉醒机制,以实现增加睡眠、改善睡眠的作用。7.本实验采用高效液相-电化学检测法建立了快捷、准确、稳定的检测单胺类中枢神经递质含量的检测方法。结果表明,待测指标成分在10分钟内全部检测完成。各峰面积与神经递质浓度线性关系良好,各待测组分日内精密度良好,拟定的色谱条件下溶剂峰对样品各待测成分无干扰,各样品溶液中四个待测成分均能达到基线分离。