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目的：揭示TGF–β1在乳腺癌细胞中对Pokemon表达的影响，并初步阐明其相关分子机制。方法：以MCF-7和MDA-MB-231两种乳腺癌细胞为研究对象，研究了TGF–β1在乳腺癌细胞中对Pokemon表达的影响及相关分子机制。实验分为三部分：第一部分研究TGF–β1在乳腺癌细胞中对Pokemon表达的影响。乳腺癌细胞以不同浓度的TGF–β1处理一定时间或者以一定浓度的TGF–β1处理不同时间，然后应用RT-PCR、免疫荧光及Western blot方法检测乳腺癌细胞中Pokemon的表达情况。第二部分研究TGF–β1在乳腺癌细胞中对Pokemon表达影响的相关分子机制。实验应用了PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002来验证TGF–β1在乳腺癌细胞中对Pokemon表达影响的相关分子机制，PI3K/Akt信号通路可能对TGF–β1在乳腺癌细胞中对Pokemon表达的影响起着重要作用。乳腺癌细胞先以PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002处理2h,再以TGF–β1处理9h，应用RT-PCR、免疫荧光技术检测Pokemon的表达情况。同时使用了Western blot方法直接检测经TGF–β1处理过的乳腺癌细胞中Pokemon、AKT及P-Akt的表达。第三部分研究TGF–β1在乳腺癌细胞中对Pokemon启动子活性的影响。以不同浓度的TGF–β1处理转染了Pokemon启动子质粒的乳腺癌细胞，然后应用双荧光素酶报告基因测定Pokemon的启动子活性。结果：1）TGF–β1在乳腺癌细胞中对Pokemon表达的影响。①RT-PCR结果：量效研究：在MCF-7细胞中，与对照组相比，加入TGF–β1后Pokemon mRNA转录水平表达升高，且以5ng/ml TGF–β1组的升高幅度最为明显（P<0.01）；时效研究：在MCF-7细胞中，与0h组相比，加入TGF–β1后,随着作用时间的延长，Pokemon mRNA转录水平表达升高，且以12h TGF–β1组的升高幅度最为明显（P<0.01）。②细胞免疫荧光结果：量效研究：在MCF-7和MDA-MB-231细胞中，与对照组相比，加入TGF–β1后Pokemon表达的平均荧光强度升高，且均以5ng/ml TGF–β1组平均荧光强度升高最为明显，在MCF-7细胞中（P<0.01），在MDA-MB-231细胞中（P<0.05）。时效研究：在MCF-7和MDA-MB-231细胞中，与0h组相比，加入TGF–β1后,随着作用时间的延长，Pokemon表达的平均荧光强度升高，且均以4h TGF–β1组的升高幅度最为明显，在MCF-7细胞中（P<0.01），在MDA-MB-231细胞中（P<0.05）。③Western blot结果：量效研究：在MCF-7细胞中，与对照组相比，加入TGF–β1后Pokemon蛋白水平的表达升高，且以5ng/ml TGF–β1组的升高幅度最为明显（P<0.01）。2）PI3K/Akt信号通路对TGF–β1在乳腺癌细胞中对Pokemon表达的作用研究。①RT-PCR结果：在MCF-7细胞中，加入PI3K/Akt信号通路的抑制剂LY294002（浓度分别为10μM和20μM）后，Pokemon mRNA转录水平明显受到抑制（P<0.05）。②细胞免疫荧光结果：在MCF-7和MDA-MB-231细胞中，加入PI3K/Akt信号通路的抑制剂LY294002（浓度为10μM），与对照组相比，10ng/ml TGF–β1处理组Pokemon平均荧光强度升高（P<0.05）。与10ng/ml TGF–β1处理组相比，加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002（浓度为10μM），Pokemon表达的平均荧光强度明显受到抑制（P<0.05）。表明TGF–β1在乳腺癌细胞中对Pokemon表达的影响可能与PI3K/Akt信号通路有关系。③Western blot结果：时效研究：在MCF-7和MDA-MB-231细胞中，与0h组相比，加入TGF–β1后，在观察的时间范围内，随着作用时间的延长，Pokemon蛋白水平表达升高，且以6h组升高幅度最为明显（P<0.01）；Akt蛋白水平的表达无明显变化，而Akt蛋白磷酸化水平的表达呈现一个先升高后降低的趋势，在MCF-7细胞中，当作用时间为30min时达最高（P<0.01），在MDA-MB-231细胞中，当作用时间为1h时达最高（P<0.01），后随着作用时间的延长，Akt蛋白磷酸化水平的表达又开始下降，在观察的时间内，在MCF-7细胞中，与30min组相比较，以6h组下降最为明显（P<0.01），在MDA-MB-231细胞中，与1h组相比较，以6h组下降最为明显（P<0.01）。3）启动子活性的结果：量效研究：在MCF-7细胞中，与对照组相比，加入TGF–β1后Pokemon启动子活性升高，且以10ng/ml TGF–β1组启动子活性明显升高（P<0.01）。结论：1）TGF–β1在乳腺癌细胞中可以上调Pokemon的表达。2）PI3K/Akt信号通路可能参与TGF–β1在乳腺癌细胞中上调Pokemon这一过程。