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目的：建立脉冲场凝胶电泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis, PFGE)基因分型方法,对天津市南开医院和天津市儿童医院临床分离的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)进行基因分型,进而对PA进行流行病学分析。方法：(1)临床送检标本按《全国临床检验操作规程》鉴定为PA,质控菌株为PAATCC27853。(2)采用K-B纸片扩散法对PA进行药敏试验,测试其对不同抗菌药物的敏感性,药敏结果按美国CLSI标准判读。南开医院PA的药敏试验检测14种抗菌药物,儿童医院PA的药敏试验检测15种抗菌药物。(3)对两家医院临床分离得到的128株PA进行PFGE基因分型和流行病学分析。(4)对临床分离出PA宿主的临床病例进行回顾性分析,判断菌株分离时段是否处在感染状态。结果：(1)感染和定植菌株的判断：来自于南开医院的72株PA中,有57株(79%)菌可能为感染菌株；而来自于儿童医院的56株PA中,有39株(70%)可能为感染菌株。两家医院的定植菌株均来自于呼吸道。(2)菌株的临床来源和分布：两家医院的PA菌株主要分离于痰标本,南开医院有51株,占71%；儿童医院为51株,占90%；其他菌株分离于胆汁、腹腔液、脓性分泌物、血液和尿液标本。南开医院的PA菌株主要来自于中西结合脑病科和呼吸科,而儿童医院菌株主要分离于呼吸科和内分泌科。(3)菌株的药物敏感性：南开医院的PA菌株对14种抗菌药物的耐药率在30%-70%之间；但儿童医院的PA菌株对抗生素的敏感性与南开医院菌株有所不同,耐药率在0%-100%之间,儿童医院菌株均对氨苄西林耐药,对丁胺卡那霉素、环丙沙星敏感。(4) PFGE分型：南开医院的72株PA被分为48个PFGE型,Ⅰ型5株；Ⅱ和Ⅲ型各4株；有14种PFGE谱各由2株菌共有,其余31株菌各表现为独特的PFGE谱。儿童医院56株PA被分为18个型别,A型26株；B型12株；C型3株：其余15株各成独特的PFGE谱。两家医院PA菌株中未见相同或相近的PFGE谱菌株。(5)儿童医院PFGE优势型和耐药性的关系：儿童医院的A和B型菌株几乎均对4种抗菌药物耐药和3种抗菌药物敏感。但对其余8种药物两型表现了不同的耐药率,其中4种药物耐药率有明显差别。(6)追溯两家医院主要PFGE型别菌株的时间和空间分布：南开医院Ⅰ型菌株是同一患者不同时间分离得到的菌株,Ⅱ型菌株和Ⅲ型菌株由不同科室患者在不同时间分离得到；儿童医院A型菌株来自于呼吸科的不同患儿,而B型菌株主要来自内分泌科的不同患儿。结论：(1)新建立的PFGE方法能够明确地对PA进行基因分型,可以作为有效的技术手段用于分子流行病学的研究和临床实践。(2)不同医院的临床分离得到的PA菌株抗生素耐药谱不同。(3)南开医院的PA菌株呈散发感染的特征,而儿童医院PA菌株表现为科室间流行趋势；两家医院PA菌株无相同基因型,故未见院间传播；PA菌株进化来源具有遗传学多元性。(4) PFGE在基因水平上对PA进行分析,可分析PA的遗传学特征、感染来源、传播途径及分布规律,对感染流行的监测提供可靠依据。