人参中与miRNA调控相关的蛋白AGO1基因克隆与序列分析

来源 :山西师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lustt005
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本文采用RACE(rapid-amplificationofcDNAends)cDNA末端快速扩增技术对药用植物人参中与miRNA调控相关重要蛋白Argonaute1(PgAGO1)的基因进行了克隆。从人参叶片中克隆PgAGO1的全长基因,并利用生物信息学方法进行分析。根据人参EST序列设计基因特异性引物,采用RACE方法对PgAGO1的cDNA全长进行克隆,并对PgAGO1蛋白的结构、功能等进行初步分析;同时采用实时定量PCR检测PgAGO1基因在人参不同组织根、茎、叶、花和愈伤中表达水平。克隆的PgAGO1全长cDNA为3776bp,其中包括5UTR204bp、3UTR254bp,基因内部包含完整的开放阅读框,可编码1103个氨基酸,预测蛋白质分子量为122.22KDa,理论等电点pI9.71;系统进化树显示:AGO蛋白产生于单子叶和双子叶植物分化之前,PgAGO1与AtAGO1、AtAGO10,OsAGO1d、OsAGO1c、OsAGO1b、OsAGO1a、OsPNH1、OsAGO17等同属一个进化分支;实时定量PCR检测结果表明PgAGO1基因在人参花中的表达量最高,在根中最低。从人参叶片中克隆得到PgAGO1的全长cDNA,为进一步研究该基因在人参组织发育中的调节作用打下基础。
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