【摘 要】
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高血压和糖尿病是动脉粥样硬化和心血管疾病发展的两个主要危险因素,两种疾病经常同时发生。临床上常用的降压药及降糖药会产生一定的副作用。食源性多肽是一种极具开发潜力的多肽类物质,具有多种调节人体生理机能的功能。啤酒是人类最古老的饮料,含有多种营养成分。本文以小麦白啤酒、黑啤酒、纯生啤酒为研究对象,对啤酒多肽进行了提取、鉴定、筛选及活性研究,获得了血管紧张素转化酶(ACE)及二肽基肽酶(DPP-Ⅳ)抑制
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高血压和糖尿病是动脉粥样硬化和心血管疾病发展的两个主要危险因素,两种疾病经常同时发生。临床上常用的降压药及降糖药会产生一定的副作用。食源性多肽是一种极具开发潜力的多肽类物质,具有多种调节人体生理机能的功能。啤酒是人类最古老的饮料,含有多种营养成分。本文以小麦白啤酒、黑啤酒、纯生啤酒为研究对象,对啤酒多肽进行了提取、鉴定、筛选及活性研究,获得了血管紧张素转化酶(ACE)及二肽基肽酶(DPP-Ⅳ)抑制率较高的小分子多肽,并对其作用机制进行了分析。主要研究结果如下:1、以小麦白啤酒(白啤)、黑啤酒(黑啤)、纯生啤酒(纯生)为原料,对多肽粗提物进行研究,应用UHPLC-Q-Oritrip-MS2进行肽段定性分析,筛选出置信度大于85%的肽段,其中白啤鉴定到68个肽段,黑啤41条、纯生50条。结果显示,白啤与纯生存在16条重合肽段,白啤与黑啤存在14条重合肽段,黑啤与纯生存在13条重合肽段,三者共有肽段为8条。采用主成分分析法对三种啤酒肽段进行统计分析,发现三种不同酿造方式的啤酒有显著差异性。2、以鉴定得到的肽段为基础,筛选高ACE和DPP-Ⅳ抑制可能性的多肽。首先通过Peptide Ranker对其进行活性评分,同时又根据先前文献对抑制肽氨基酸活性位点的报道,筛选出符合ACE及DPP-Ⅳ抑制肽氨基酸序列的肽段。对筛选出的肽段进行吸收、代谢、毒性预测,保留能够有效被人体吸收代谢的毒性较低的肽段,最后对这些肽段进行分子对接模拟评分评价,筛选出六条肽段,分别为白啤中两条肽段LAKLQR和VPFPHTP,黑啤中两条肽段DLGGFFGFQR和LPQQQAQFK,纯生中两条肽段LNFDPNR和LAQMEAIR。3、通过体外活性实验验证了筛选出的肽段的ACE及DPP-Ⅳ抑制活性,利用分子对接探究了多肽和ACE及DPP-Ⅳ之间的构效关系。结果表明六条肽段都有一定的ACE及DPP-Ⅳ抑制能力。分子对接研究结果表明,六条多肽都可以与ACE酶和DPP-Ⅳ酶相互作用,通过氢键和疏水作用紧密结合,并证实了六条多肽和蛋白酶之间的相互作用模式可能为非竞争性抑制。
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