牛磺酸（2-氨基乙磺酸,Taurine）,是机体内含量最丰富的游离氨基酸之一,在机体各个系统发挥重要的生理学作用。半胱亚磺酸脱羧酶（CSD）是动物体内牛磺酸生物合成途径的关键酶。为了探讨CSD cRNA原位杂交探针构建及其在成年小鼠大脑中的表达,本实验根据GENE BANK中CSD cDNA的全长序列设计特异引物,并从小鼠大脑基因组中克隆CSD目的片段,以此目的片段为模板体外转录法合成CSD cRNA探针。将探针在特定条件下与经过特殊处理的小鼠大脑组织中的mRNA杂交,然后经过一系列的后处理来检测CSD mRNA在小鼠大脑皮质中的表达情况。卵巢的发育和功能受神经和体液的双重调节,但对于神经对卵巢调节的研究较少。为了研究新生大鼠卵巢上神经切除对其生殖能力的影响,出生后2 d雌性大鼠卵巢上神经采用手术法切除,至性成熟时对其发情周期、卵巢大小、卵巢重量、怀孕率、产仔数进行统计分析,并通过大体形态学和组织切片法观察其卵巢形态学和组织学特点。实验结果如下:㈠CSD cRNA原位杂交探针构建及其在成年小鼠大脑中的表达⑴从成年小鼠大脑中提取总RNA,利用设计好的CSD引物进行RT-PCR扩增,成功得到486bp的目的片段。⑵将获得的目的片段纯化后,与pGEM-T-Easy vector载体连接,获得重组质粒,并将重组质粒进行测序。测序结果表明目的片段正确插入质粒载体中。⑶将重组质粒进行限制性酶切使其线性化,并纯化。结果表明,限制性酶切后质粒载体完全线性化,且纯度很好。⑷将标记好的探针溶液按一定的浓度稀释比进行浓度梯度稀释,然后在PVDF膜上点杂交。与对照比较表明探针标记效率较高,能够满足原位杂交的使用要求。⑸CSD阳性信号广泛分布于小鼠大脑皮质区分子层、外颗粒层、外锥体细胞层、内颗粒层、内锥体层和多形细胞层。其中,在外锥体细胞层的分布最为密集。㈡卵巢上神经切除对雌性大鼠生殖能力的影响卵巢上神经切除后大鼠发情间期延长,发情期缩短,怀孕率降低,产子数减少,卵巢重量下降,卵泡数减少,卵泡闭锁严重,黄体增多,说明卵巢上神经对大鼠生殖能力具有重要影响。