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非编码RNA包括microRNAs,Long non-coding RNAs,以及Circular RNAs,是当今生命科学领域中研究最热门的一个分支。其中,目前研究最为普遍的是microRNAs。MicroRNAs是一类短小的、高度保守的、内源性非编码RNA,在骨骼肌的发育过程中发挥着至关重要的调控作用。在本研究中,参考实验室对徐淮山羊骨骼肌microRNAs高通量测序的结果,结合RT-qPCR分析miR-487b-3p在徐淮山羊不同发育时期(胎羊时期、成年羊时期),不同组织(心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌、腿肌)的表达谱,并构建miR-487b-3p过表达载体以及合成miR-487b-3p化学模拟物分别转染成肌细胞(C2C12),研究其在骨骼肌肌生成过程中调控作用。此外,还对miR-487b-3p的靶基因IRS1进行预测和功能探究。本研究内容和主要结果如下:(1)利用miRBase,Targetscan数据库对miR-487b-3p及其靶基因IRS1 3’UTR序列保守性进行分析,发现mi R-487b-3p成熟序列以及与IRS1 3’UTR结合区序列在山羊、人、小鼠、牛以及绵羊等物种间具有高度的序列保守性。(2)miR-487b-3p在徐淮山羊不同发育阶段(胎羊时期、成年羊时期)、不同组织中都广泛表达,miR-487b-3p在胎羊和成年羊肌肉组织的表达量高于其他组织,且miR-487b-3p在徐淮山羊胎羊肌肉组织中的表达量显著高于其在成年羊肌肉组织中的表达量,表明mi R-487b-3p属于非肌肉特异性microRNA,且可能在肌肉发育过程中有着重要的调控作用。(3)将pcDNA3.1(+)-miR-487b-3p、miR-487b-3p mimics、negative control(NC)、miR-487b-3p inhibitors、anti-negative control(anti-NC)转染至C2C12细胞,分别过表达miR-487b-3p或者抑制miR-487b-3p表达。经RT-qPCR和Western blot实验探究过表达miR-487b-3p或抑制miR-487b-3p表达对C2C12成肌细胞增殖、分化的影响;此外,结合CCK-8和EdU实验共同探究miR-487b-3p对C2C12成肌细胞的影响。结果表明,miR-487b-3p抑制成肌细胞(C2C12)的增殖和分化。(4)成功构建了miR-487b-3p 3个靶基因IRS1、ITGA6、ZMYND8的野生型和突变型荧光素酶报告基因载体。双荧光素酶报告基因实验证明miR-487b-3p可以靶向作用于IRS1、ITGA6和ZMYND8 3’UTR区。基于生物信息学(David、KEGG)分析、RT-qPCR和Western blot实验发现:miR-487b-3p抑制IRS1的表达。(5)通过RNAi实验,结合Western blot、EdU进一步探究发现,抑制IRS1表达会抑制C2C12成肌细胞增殖、分化,与过表达miR-487b-3p趋势一致。(6)IRS1在将信号从胰岛素或胰岛素样生长因子受体传递至MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路的过程中起关键作用;实验结果揭示了mi R-487b-3p调控骨骼肌肌生成的机制,即miR-487b-3p通过作用IRS1,参与MAPK/ERK和PI3K/AKT通路的调控网络,进而对骨骼肌成肌细胞增殖、分化产生影响。