论文部分内容阅读
目的:通过对中国西南地区库蠓种类分布调查与整理,丰富西南地区库蠓物种多样性;PCR扩增库蠓的线粒体DNA COⅠ和Cytb序列,结合形态学分类对其进行种类鉴别和系统发育分析,为实现吸血蠓快速、准确鉴定奠定基础。方法:1.采用网扫法、马氏网采集法和灯诱法进行库蠓昆虫采集,实验室内制作永久玻片标本,显微镜下根据形态学特征进行库蠓种类的鉴定,整理中国西南地区(四川、重庆、贵州、云南)库蠓名录。2.取待试库蠓进行DNA的提取,PCR扩增线粒体DNA COⅠ和Cytb基因的目的片段。序列经测定、校对、比对等分析后,选择邻接法(NJ)、最大似然法(ML)或最大简约法(MP)构建系统发育树。结果:1.整理中国西南地区库蠓属10亚属129种,其中3种无法归为任一亚属,四川分布63种,重庆分布22种,贵州分布41种,云南分布89种,上述地区新纪录17种。2.PCR扩增得到库蠓约650 bp的COⅠ序列、约500bp的Cytb序列,线粒体DNA COⅠ和Cytb序列的A+T含量(66.7/79.7)都远高于C+G含量(33.3/20.3);COⅠ序列通过BLAST与Genbank中已上传库蠓序列相似度很高,种类匹配成功;COⅠ和Cytb序列同种类不同地理种群、个体的序列比对相似度高,与形态鉴定结果一致;COⅠ和Cytb序列的遗传距离经统计学分析,表明COⅠ序列的种内遗传距离分别与种间、亚属间、属间遗传距离具差异;Cytb序列的种内、种间、亚属间、属间遗传距离均有差异;基于COⅠ基因对库蠓6个亚属代表种及形态相似的近缘种构建的NJ树、ML树和MP树,基于Cytb基因构建12种库蠓的NJ和MP分子系统树,都得到和形态学鉴定一致的结果,很好区分库蠓不同种类(包括近缘种),库蠓不同亚属各自构成一个单系群,不同种类各自形成一个单系,无种类交叉,同种类不同地理种群聚为一支,结合形态特征进一步明确亲缘关系。结论:1.丰富西南地区库蠓物种多样性,完善西南地区库蠓地理区划,为上述地区研究蠓传疾病的发生、防治及野外防治蠓害提供基础数据。2.初步验证COⅠ和Cytb基因在吸血库蠓(尤其是近似、近缘种)种类鉴别和系统发育分析中的有效性,为后续开发更多有效分子标记奠定基础。