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副溶血弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐致病菌,广泛存在于近海岸的海水及鱼、虾、贝类等海产品中。副溶血弧菌可导致对虾早期死亡综合症（EMS）,给亚洲及我国水产养殖业造成了巨大损失。近年来,水产养殖业抗生素滥用,造成了副溶血弧菌耐药菌株的出现和多种常规抗生素的失效,显著危害水产品的食用安全性和人民的健康。本论文主要研究多种中草药提取物与水产常用抗生素对副溶血弧菌的协同抑菌效果,并初步探索了其抑菌的作用机制;同时将抗生素与中草药提取物联合应用于脊尾白虾养殖中,探索其对脊尾白虾副溶血弧菌病的防治效果和机制。本论文为水产养殖弧菌病的防治开辟了新的思路。主要研究结果如下:1.中草药提取物与抗生素对副溶血弧菌的体外抑菌作用研究筛选出四组对副溶血弧菌具有协同抑菌作用的中草药与抗生素:1/8 MIC黄精:1/4 MIC土霉素、1/4 MIC胡椒:1/4 MIC土霉素、1/4 MIC山楂:1/4 MIC土霉素、1/4 MIC甘草:1/8 MIC土霉素。探索其抑菌机制,发现胡椒、黄精、山楂可以不同程度的改变副溶血弧菌细胞的膜电位和电导率,从而提高细胞膜通透性;黄精、山楂、甘草可以不同程度的提高其细胞壁通透性。比较土霉素、胡椒与黄精对副溶血弧菌外排泵相关基因表达的影响。发现加入土霉素、黄精与胡椒后,ABC外排泵基因vp1998（tolC）、vp1999相比于空白组表达均上调,且加入土霉素vp1998、vp1999基因分别上调151.91倍和94.84倍。除此之外,我们发现胡椒组RND家族转运蛋白、外膜蛋白和离子泵基因的表达与土霉素一致,除了vpa0096、vpa1186和vp1178,其他基因全部上调;而黄精组除了vp1998和vp1999表达上调,其余21个基因均表达下调。加入多重耐药泵抑制剂CCCP后,发现土霉素与黄精、胡椒、山楂和甘草的协同抑菌作用均消失。2.副溶血弧菌外排泵相关基因的敲除及与联合抑菌的相关性研究本章成功构建了副溶血弧菌基因敲除株Vp:△tolC、Vp:△1993和Vp:△1999,探索ABC外排泵在土霉素与中草药提取物协同抑菌中的机制。对敲除株与野生株生长曲线、耐酸、耐胆汁、耐药性等特性进行比较,发现（1）ABC外排泵相关基因tolC、vp1993和vp1999与副溶血弧菌的生长、耐酸能力以及细胞壁的通透性基本无关。tolC敲除能明显增强副溶血弧菌细胞膜通透性,显著降低对胆汁的耐受性。（2）ABC外排泵相关基因tolC、vp1993和vp1999与土霉素和中草药提取物的协同抑菌作用无关。tolC敲除株对红霉素的MIC降低2倍,且红霉素与胡椒的联合抑菌作用由无关变为相加作用。3.中草药提取物与抗生素联用对脊尾白虾弧菌病的防治（1）实验室脊尾白虾养殖条件为温度25℃、盐度20度、pH 8.0和养殖密度30尾/盆,副溶血弧菌浸泡感染浓度为1.0×108 CFU/mL。（2）土霉素与山楂联用可提高土霉素对脊尾白虾弧菌病的防治能力。联合组（土霉素和山楂）可不同程度提高对虾消化酶（胃蛋白酶、纤维素酶）、免疫酶（AKP）和溶菌酶活性,且胃蛋白酶、AKP和溶菌酶的活性显著高于土霉素组（p<0.05）。联合组显著上调对虾Toll受体基因的表达,且其上调作用强于土霉素组（p<0.05）。