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目的:本研究旨在通过观察和比较骨不连断端及其周围不同组织(正常骨、骨端瘢痕、断端硬化骨)的BMP-2、TGF-β1的表达水平及VEGF所标记的血管数量,以此为判断指标来比较各组织的成骨潜能,进一步探讨“骨不连断端成骨能力区域划分”概念的合理性及优越性;同时通过对比骨不连病人手术后配合伤科接骨片治疗所取得的临床结果,来研究术后配合伤科接骨片治疗骨不连的临床疗效。 方法:收集2015年8月至2016年4月西安市红会医院创伤骨科收治的四肢骨不连患者相关临床资料共30例,患者平均年龄46岁(21岁-71岁),男23例,女7例。将收集的30例病例根据诊断分为肥大型骨不连和萎缩型骨不连各15例,术中进一步观察确认后,仔细取断端骨端瘢痕、断端硬化骨、正常骨3种不同组织标本,利用光学显微镜观察3处不同组织HE染色后的结构特点,免疫组织化学二步法对骨不连组织中BMP-2及TGF-β1、VEGF的表达进行半定量分析,BMP-2及TGF-β1由2位病理科医师观察并各自计数,观察其染色的阳性细胞数量及其染色的强度。按阳性细胞<5%,计0分,5%-25%记1分,26%-50%记2分,51%-75%记3分,>75%记4分;染色强度:棕褐色为3分,棕黄色为2分,黄色为1分,没有着色为0分。最后计算2项评分的乘积,结果0-1为阴性(-),2-4为弱阳性(+),5-8为中阳性(++),9-12为强阳性(+++)。分析数据阴性、弱阳性、中阳性、强阳性分别评分为“0、1、2、3”,然后行数据统计分析。VEGF标记的血管使用血管内皮细胞生长因子(VEGF),使用Weidner血管计数法分析VEGF免疫组化的染色结果,算出每个标本的血管密度。所有资料数据均釆用SPSS19.0统计软件进行数据分析。BMP-2和TGFβ1的表达量为等级资料,采用秩和检验。通过VEGF测定血管密度为计量资料,两组之间比较采用独立样本t检验。检验标准为α=0.05,P<0.05提示差异具有统计学意义;P<0.01提示具有显著差异。 术后将30例患者随机分为两组,对照组术后不服用伤科接骨片,治疗组术后口服伤科接骨片,通过X线片观察两组患者术后第2、4个月的骨痂生长情况,以骨痂生长评分为判断指标,然后比较两组骨痂生长评分结果、愈合率来评价伤科接骨片对于骨不连的治疗效果,骨痂生长评分为等级资料,采用秩和检验。 结果:1、组织学检查:HE染色后在光学显微镜下观察可见,正常骨组织(成骨活跃区):骨小梁完整,哈弗氏系统完整、骨细胞丰富、血管数量较多;断端硬化骨(成骨失活区):骨小梁紊乱、矿化不均,哈弗氏系统较完整,骨细胞稀少,血管稀少,可见多个骨陷窝中骨细胞结构不完整,多见空旷的骨陷窝;骨端瘢痕(成骨失活区):主要为胶原组织,成纤维细胞数量较少、呈散在分布,血管稀少,少量组织中含有残留的骨小梁。2.应用免疫组化二步法分别染色检测骨不连断端正常骨、断端硬化骨、骨端瘢痕三种组织中BMP-2、TGF-β1、VEGF的表达,其中BMP-2、TGF-β1在正常骨组织中(成骨活跃区)的表达明显强于断端硬化骨及骨端瘢痕(成骨失活区);VEGF标记血管,使用Weidner血管计数法分析免疫组化的染色结果,计算每个标本的血管密度,正常骨组织中(成骨活跃区)的血管密度明显高于断端硬化骨及骨端瘢痕(成骨失活区);断端硬化骨与骨端瘢痕相比,前者血管密度大于后者,BMP-2、TGF-β1的表达两者无明显差异,无统计学意义。 术后30例骨不连病人均完全愈合,1例病人术后第5个月下地活动时时不慎摔倒致钢板断裂,骨愈合良好。术后第2、4个月的骨痂生长评分比较结果,治疗组优于对照组,有统计学意义(P<0.05)。 结论:骨不连断端不同组织、不同区域之间存在成骨能力的差异,“成骨断端能力区域划分”的概念具有一定的合理性。术后的随访情况表明伤科接骨片对于骨不连的治疗具有一定效果,可加速骨痂生长,促进骨愈合。