论文部分内容阅读
第一部分TRAIL、阿霉素、顺铂、IFN-γ分别对MG-63细胞增殖及凋亡的调节作用背景与目的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能够诱导多种肿瘤细胞发生凋亡，但并不是所有的肿瘤细胞都对其敏感。以往研究表明一些化疗药物能够增强TRAIL所诱导的肿瘤细胞凋亡。本部分实验旨在研究TRAIL、阿霉素、顺铂、IFN-γ分别作用于人骨肉瘤MG-63细胞时，对其增殖的抑制作用及诱导凋亡作用。方法采用MTT法检测TRAIL、阿霉素、顺铂、IFN-γ在不同浓度及不同时间下，分别作用于人骨肉瘤MG-63细胞时，对其增殖的抑制作用。用流式细胞仪检测TRAIL、阿霉素、顺铂、IFN-γ分别作用于人骨肉瘤MG-63细胞时，诱导其凋亡的作用。DNA凝胶电泳检测TRAIL作用于人骨肉瘤MG-63后人骨肉瘤MG-63的凋亡率。结果(1)不同浓度TRAIL对MG-63细胞均具有杀伤作用。当TRAIL浓度较低(小于1000ng／ml)时，杀伤作用的增加不明显，相同时间不同浓度组比较，差异无显著性(P＞0．05)；而当其浓度增高时，相同时间不同浓度组比较，差异有显著性(P＜0．05)。(2)阿霉素可杀伤MG-63细胞，药物对细胞的杀伤率随着药物浓度的增高而增加，相同时间不同浓度组间比较差异具有显著性(P＜0．05)。(3)顺铂可杀伤人骨肉瘤MG-63细胞，药物对细胞的杀伤率随着药物浓度的增高而增加，相同时间不同浓度组间比较差异具有显著性(P＜0．05)。(4)IFN-γ可杀伤骨肉瘤细胞，这种杀伤作用在24小时内较弱，24小时后显著增大(P＜0．05)。结论(1)TRAIL浓度在高于1000 ng／ml时，对人骨肉瘤MG-63细胞的杀伤效果增加明显。(2)阿霉素浓度在高于4．3μl／ml时，对人骨肉瘤MG-63细胞的杀伤效果增加明显。(3)顺铂浓度在高于1μmol／L时，对人骨肉瘤MG-63细胞的杀伤效果增加明显。(4)IFN-γ杀伤作用在24小时内对人骨肉瘤MG-63较弱，24小时后显著增大。第二部分TRAIL、阿霉素、顺铂、IFN-γ联合作用对MG-63细胞增殖及凋亡的调节作用背景与目的化疗是治疗骨肉瘤的一种常用手段，但化疗药物对机体的毒副作用大，因而限制了其临床上的应用。因此，如何调整化疗药物剂量、减少其副作用是当前非手术治疗骨肉瘤的重点。本实验旨在研究TRAIL、阿霉素、顺铂、IFN-γ联合对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用。方法采用MTT法检测当由TRAIL、阿霉素、顺铂、IFN-γ组成的不同组合，分别作用于人骨肉瘤MG-63时，对其增殖的抑制作用。用流式细胞仪检测由TRAIL、阿霉素、顺铂、IFN-γ组成的不同组合，分别作用于人骨肉瘤MG-63时，诱导其凋亡的作用。结果(1)TRAIL联合阿霉素及INF-γ组对人骨肉瘤MG-63细胞生长的影响相比其他联合应用组明显增加，差异有显著性(P＜0．05)。(2)TRAIL联合顺铂及INF-γ组对人骨肉瘤MG-63细胞生长的影响相比其他联合应用组增加明显，差异有显著性(P＜0．05)。结论(1)TRAIL联合阿霉素及INF-γ组对人骨肉瘤细胞MG-63的杀伤效果增加明显。(2)TRAIL联合顺铂及INF-γ组对人骨肉瘤细胞MG-63的杀伤效果增加明显。第三部分TRAIL、阿霉素、IFN-γ联合作用于人骨肉瘤MG-63，TRAIL相关受体表达研究背景与目的目前认为细胞表面死亡受体的表达状况，可以从一定程度上反映靶细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感度。如何通过上调死亡受体的表达水平而增强肿瘤细胞对TRAIL的敏感性，使TRAIL选择性杀伤癌细胞成为近年来的研究热点本实验旨在研究TRAIL、阿霉素、IFN-γ联合作用于骨肉瘤MG-63细胞引起凋亡作用的机制。方法采用免疫组化法检测收集的病人骨肉瘤石蜡切片中DR5及YY1基因表达情况。用RT-PCR法检测TRAIL、阿霉素、IFN-γ组成的不同组合，分别作用于人骨肉瘤MG-63后人骨肉瘤MG-63中DR5及YY1的表达情况。用western blot法检测TRAIL、阿霉素、IFN-γ组成的不同组合，分别作用骨肉瘤MG-63后人骨肉瘤MG-63中DR5及YY1的表达情况。结果(1)收集的病人骨肉瘤细胞中DR5与YY1基因表达情况未发现有显著相关性(P＞0．05)。(2)TRAIL联合阿霉素及INF-γ对人骨肉瘤MG-63细胞中DR5及YY1的表达有较明显影响，差异有显著性(P＜0．05)。结论(1)收集的病人骨肉瘤石蜡切片中DR5与YY1基因表达情况未发现有显著相关性。(2)TRAIL联合阿霉素及INF-γ组对人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡作用强于其他组合(TRAIL组、阿霉素组和TRAIL+可霉素组)，可能是因为他们联合作用时，通过增强TRAIL相关受体DR5基因的表达及降低YY1基因表达引起的。