阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种与年龄紧密相关的神经系统退行性疾病,临床上以记忆衰退和认知障碍为症状,病理上以脑内淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积、神经纤维缠结形成、神经元丢失等为特征。AD包括家族性和散发性两种,研究表明其病理机制可能与多种因素相关:Aβ沉积、离子通道、钙代谢紊乱、血管性异常、tau蛋白异常和氧化应激等。随着研究的深入发现Aβ在AD的发病进程中有着重要作用,认为Aβ的代谢异常打破了其生成与清除间的平衡关系,引发Aβ沉积。在Aβ生成与清除的动态过程中,多种酶类起到了关键作用,包括生成相关的β-、γ-分泌酶和降解相关的脑啡肽酶(Neprilysin,NEP)、胰岛素降解酶(Insulin degrading enzyme,IDE)、基质金属酶2/9(Matrix metalloproteinase2/9,MMP 2/9)等,共同维持着Aβ含量的平衡状态。有研究提示,睾酮下降可能是AD的一个危险因素,在AD之前或AD的早期就有可能出现。前瞻性研究中将AD的诊断与血睾酮水平的变化进行比较,对于首次临床诊断正常的男性调查对象随访4-37年(平均19年),最终研究结果显示,患AD的调查对象水平下降,而且其下降先于AD诊断5-10年,表明雄激素下降发生在AD的临床症状之前。Rosario等尸检发现,在50-97岁的男性中脑组织的睾酮水平随年龄下降,AD患者下降的程度显著高于正常人。轻度神经病理改变的患者脑组织中睾酮水平低于AD最早期的患者,说明睾酮下降发生在病理改变之前,并且可能促进病程的进展,年龄相关的雄激素下降是AD的危险因素。雄激素在AD发生发展中发挥作用主要通过以下三种途径:(1)雄激素受体(Androgen receptor,AR)通路。在下丘脑、海马、颞叶皮质中均存在雄激素受体,在5α-还原酶的作用下睾酮可转变为有生物效能的雄激素-双氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)。睾酮和DHT都能结合雄激素受体发挥作用。(2)雌激素受体通路。睾酮作为一种激素原,在芳香化酶的作用下转变为17β-雌二醇,后者与雌激素受体结合,间接影响AD的发生发展。(3)促性腺激素通路。雄激素是下丘脑-垂体-性腺轴中的重要激素之一,雄激素水平的下降通过负反馈调节引起该轴中其他激素水平的变化。由此引起的黄体生成素和卵泡刺激素下降可能与AD相关。雄激素在AD发生发展中可能的作用机制,调节Aβ的聚集、降低tau磷酸化、增加突触可塑性、减少氧化性应激、调节有丝分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路、增加神经生长因子的表达、抑制炎症反应。对抗雄激素治疗的前列腺癌患者随访发现,在轻度神经病理改变的男性AD患者中,血清中睾酮、雌二醇大幅度降低,而Aβ水平显著升高,脑组织内Aβ与睾酮水平成反比。如前面提及,雄激素可以通过直接的雄激素受体通路或者间接的雌激素受体通路调节Aβ水平。睾酮主要通过减少Aβ的产生和增加Aβ的清除两方面降低Aβ水平。Aβ前体蛋白(Amyloid precursor protein,APP)主要有两个相互竞争的裂解途径:APP在β-裂解酶和γ-分泌酶的作用下转化为Aβ;通过α-分泌酶不产生淀粉样变,阻止Aβ的产生。睾酮可调节原代大脑皮质神经元内的APP,促进非淀粉样变的APP片段的分泌减少Aβ的产生。早老素(Presenilin,PS)是γ-分泌酶复合体的主要组成部分,去势雄性小鼠补充雄激素后PS1/2水平均升高,雄激素可能通过上调PS,增加γ-分泌酶的数量或者活性,进而减少Aβ的产生。Aβ可在Aβ降解酶类的作用下分解为较小的分子肽类而被清除出体外,而降解酶功能的异常可能会促进AD的发生。目前研究发现的主要降解酶类有NEP、IDE、MMPs。雄激素下降会导致NEP水平降低以及Aβ水平升高,DHT替代治疗可恢复NEP和Aβ水平,故NEP在雄激素调节Aβ中发挥一定作用。雄激素还可能通过调节甲状腺素运载蛋白的水平,影响Aβ的清除。细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(Extracellular matrix metalloproteinase inducer,CD147)为I型跨膜糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族,能够刺激肿瘤细胞中的成纤维细胞分泌MMPs,进而导致细胞基底膜和间质成分降解,从而在肿瘤浸润和转移过程中起到重要作用。但是近年来,有研究报道发现CD147参与AD相关Aβ的生成与调解,但其具体分子机制仍不十分明确。有研究认为,CD147是γ-分泌酶复合体的又一个亚基,参与负向调节APP的产生Aβ,又有研究表明CD147可参与到Aβ的清除降解。第一部分双氢睾酮对SH-SY5Y细胞中CD147表达的调节作用目的:以SH-SY5Y细胞为研究对象,运用免疫荧光、Western blot观察双氢睾酮(DHT)对CD147蛋白表达的影响作用,以及经典的雄激素核受体(AR)抑制剂氟他胺(Flutamide,F)能否阻断DHT介导的CD147蛋白表达上调的作用。进一步利用Chip技术证明CD147基因启动子区存在AR结合位点。方法:1.双氢睾酮对SH-SY5Y细胞中CD147表达的剂效性实验实验选用融合度达60-70%的SH-SY5Y细胞,随机分为对照组(0n M)、1 n M处理组(1 n M)、10 n M处理组(10 n M)、100 n M处理组(100n M),对照组给予等量DMSO处理,作用6 h后提取细胞蛋白进行Western blot检测,观察不同剂量DHT对CD147蛋白表达的影响。2.免疫细胞荧光染色检测氟他胺预处理对双氢睾酮影响CD147表达的作用实验选用融合度达60-70%的SH-SY5Y细胞,随机分为对照组(Con)、氟他胺+双氢睾酮组(F+DHT)、双氢睾酮组(DHT)。根据第一部分实验结果确定F+DHT组、DHT组的DHT给药方式为100 n M、6 h。氟他胺预处理为10μM、1 h。作用完毕后,免疫细胞荧光染色。激光共聚焦采集图像,计算平均荧光强度,分析在DHT作用下,CD147蛋白表达变化。3.Western blot实验检测氟他胺预处理对双氢睾酮影响CD147表达的作用实验选用融合度达60-70%的SH-SY5Y细胞,随机分为对照组(Con)、氟他胺+双氢睾酮组(F+DHT)、双氢睾酮组(DHT)。根据第一部分实验结果确定F+DHT组、DHT组给药方式为100 n M、6 h。氟他胺预处理时间为1 h。作用完毕后,提取细胞蛋白进行Western blot检测,Odyssey红外成像系统显影成像,以GAPDH的表达做为内参,测定各组CD147蛋白的相对表达水平。4.染色质共沉淀实验检测CD147启动子区雄激素受体结合位点实验选用融合度达80-90%的SH-SY5Y细胞,随机分为空白组(Blank),Ig G组(Ig G),阳性对照组(Input)和雄激素受体组(AR)。AR组加入AR特异性抗体,Ig G加入AR抗体同源性Ig G,Input组加入试剂盒中阳性对照抗体,Blank组加入无菌水。通过交联和裂解、超声处理断裂DNA、交联蛋白/DNA的免疫沉淀、蛋白/DNA复合物的洗脱、蛋白/DNA复合物与游离DNA的反交联、DNA纯化、Realtime-PCR、琼脂糖凝胶电泳检测CD147启动子区是否存在雄激素受体结合位点,产物测序。结果:1.双氢睾酮对SH-SY5Y细胞中CD147表达的剂效性实验不同剂量的DHT作用于SH-SY5Y细胞6 h,CD147蛋白条带光密度的相对表达值分别为0 n M组0.26±0.02、1 n M组0.27±0.01、10 n M组0.31±0.01、100 n M 0.35±0.02。以100 n M组CD147表达最多,较其他三组均明显升高(P<0.05);其次为10 n M组,较1 n M和0 n M组均有升高(P<0.05);1 n M组与0 n M组间无明显变化。2.氟他胺预处理对双氢睾酮影响CD147表达的作用CD147的免疫细胞荧光染色结果显示:与Con组(0.046±0.007)相比,F+DHT组(0.054±0.003)的平均荧光强度略增加,DHT组(0.069±0.005)荧光强度明显增加(P<0.05);与DHT组(0.069±0.005)相比,F+DHT组(0.054±0.003)荧光强度有所降低(P<0.05)。3.氟他胺预处理对双氢睾酮影响CD147表达的作用CD147的Western blot结果显示:与Con组(0.54±0.02)相比,F+DHT(0.60±0.04)组有所升高,差异有统计学意义(P<0.05),DHT组(0.67±0.04)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与DHT组(0.67±0.04)相比,F+DHT组(0.60±0.04)有所下降(P<0.05)。各组条带均相对于内参GAPDH的光密度值作对比。4.CD147启动子区雄激素受体结合位点的检测DNA断裂片段大小在200-1000bp范围内,可用于后续实验。Realtime-PCR结果显示:Input组最早出现扩增高峰,Ct值为24.93±0.09,其次为AR组27.32±0.07,Ig G组30.51±0.24,Blank组43.13±4.00。琼脂糖凝胶电泳显示:Input组条带最亮IOD值为50645±7550.64,其次为AR组27042±7683.61,Ig G组13692±1886.75,Blank组未显示出条带。扩增产物经测序与预期结合碱基序列AAGGACGTTCTGACC一致。第二部分CD147对Aβ42诱发SH-SY5Y细胞损伤的调节作用目的:以SH-SY5Y细胞为研究对象,通过感染LV-BSG-RNAi慢病毒干扰CD147蛋白表达并给予外源性Aβ42造成细胞损伤后,检测细胞活力、形态、凋亡相关蛋白的表达变化,并观察细胞培养基上清中Aβ42的含量变化。探讨CD147与Aβ42清除以及细胞损伤之间的关系。方法:1.Aβ42对SH-SY5Y细胞活力的影响作用实验选用融合度达60-70%的SH-SY5Y细胞,随机分为对照组(0μM)、1μM Aβ42处理组(1μM)、10μM Aβ42处理组(10μM)、20μM Aβ42处理组(20μM)、40μM处理组(40μM)。加入含不同浓度的Aβ42无血清培养基100μl,对照组加入等量PBS,每个浓度设置3个平行复孔,培养24 h后每孔中加入MTS试剂盒中检测试剂20μl,37℃孵育2 h。Infinite200酶标仪490 nm检测吸光度值,观察Aβ42不同浓度作用对细胞活力的影响变化。2.慢病毒LV-BSG-RNAi感染SH-SY5Y细胞效率的检测实验选用融合度达60-70%的SH-SY5Y细胞,随机分为对照组(Con)、干扰组(RNAi)。对照组加入阴性对照Con077慢病毒(1E+9 TU/ml),干扰组加入LV-BSG-RNAi慢病毒(8E+8 TU/ML)。感染12 h后更换常规培养基,37℃5%CO2培养箱中培养,感染72 h后倒置显微镜观察感染效率。Western blot和RT-PCR实验检测干扰CD147表达效率。3.干扰CD147表达对SH-SY5Y细胞外Aβ42清除的作用实验选用感染3 d后细胞,随机分为对照组(Con)、对照+Aβ42组(Con+Aβ42)、干扰组(RNAi)、干扰+Aβ42组(RNAi+Aβ42)。Aβ42选取实验一中确定的最低有效作用浓度10μM,作用24 h。收集细胞上清液,Elisa实验检测细胞上清液中Aβ42的变化。4.干扰CD147表达对Aβ42损伤SH-SY5Y细胞活力的作用实验选用感染3 d后细胞,随机分为对照组(Con)、对照+Aβ42组(Con+Aβ42)、干扰组(RNAi)、干扰+Aβ42组(RNAi+Aβ42)。含10μM Aβ42无血清培养基作用24 h后每孔中加入MTS试剂盒中检测试剂20μl,37℃孵育2 h。Infinite200酶标仪490 nm检测吸光度值,观察不同组间细胞活力的变化。5.干扰CD147表达对Aβ42损伤SH-SY5Y细胞形态的作用实验选用感染3 d后细胞,随机分为对照组(Con)、对照+Aβ42组(Con+Aβ42)、干扰组(RNAi)、干扰+Aβ42组(RNAi+Aβ42)。10μM Aβ42作用24h后倒置显微镜观察细胞形态变化。6.干扰CD147表达对Aβ42损伤SH-SY5Y细胞胞核形态的作用实验选用感染3 d后细胞,随机分为对照组(Con)、对照+Aβ42组(Con+Aβ42)、干扰组(RNAi)、干扰+Aβ42组(RNAi+Aβ42)。10μM Aβ42作用24 h后,Hoechst 33258染色,倒置荧光显微镜观察细胞核形态变化。7.干扰CD147表达对Aβ42调节SH-SY5Y细胞凋亡相关蛋白的作用实验选用感染3 d后细胞,随机分为对照组(Con)、对照+Aβ42组(Con+Aβ42)、干扰组(RNAi)、干扰+Aβ42组(RNAi+Aβ42)。10μM Aβ42作用24 h后Western blot实验检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果:1.Aβ42对SH-SY5Y细胞活力的影响作用MTS检测细胞活力结果显示,Aβ42作用24 h可剂量依赖性引起SH-SY5Y细胞活力降低,与对照组吸光度值0.80±0.04相比,1μM组0.75±0.08未有明显改变,其余各组10μM组0.61±0.01、20μM组0.59±0.01、40μM组0.48±0.01均存在显著性降低(P<0.05)。后续相关实验均选取10μM Aβ42作用24 h。2.慢病毒LV-BSG-RNAi感染SH-SY5Y细胞效率的检测慢病毒LV-BSG-RNAi在感染后3 d,感染率可达80%以上;RT-PCR检测结果显示,与Con组相比RNAi组CD147的m RNA水平降低了65.60±4.26%(P<0.01);Western blot检测结果显示,与Con组相比RNAi组CD147的蛋白水平降低了73.62±6.31%(P<0.01)。后续相关实验均选取慢病毒感染3 d。3.干扰CD147表达对SH-SY5Y细胞外Aβ42清除的影响作用Elisa检测培养基上清中Aβ42含量结果显示:Con组与RNAi组未加入外源性Aβ42,上清中Aβ42含量较低,分别为8.67±2.02、8.92±1.48(pg/ml),两组间无明显变化;Con+Aβ42组和RNAi+Aβ42组加入了外源性Aβ42,上清中Aβ42含量较高,与Con+Aβ42组72.94±4.64相比,RNAi+Aβ42组92.48±6.29明显增高(P<0.05)。4.干扰CD147表达对Aβ42损伤SH-SY5Y细胞活力的影响作用MTS检测细胞活力结果显示:与Con组(0.77±0.05)相比,Con+Aβ42组(0.57±0.06)、RNAi+Aβ42组(0.39±0.03)细胞活力明显下降(P<0.01),RNAi组(0.72±0.03)无明显变化;与RNAi组(0.72±0.03)相比,Con+Aβ42组(0.57±0.06)、RNAi+Aβ42组(0.39±0.03)细胞活力明显下降(P<0.01);与Con+Aβ42组(0.57±0.06)相比,RNAi+Aβ42组(0.39±0.03)细胞活力明显下降(P<0.01)。5.干扰CD147表达对Aβ42损伤SH-SY5Y细胞形态的作用Con组细胞多呈梭形、三角形,胞体较大、胞浆饱满,突起交织;RNAi组细胞大部分呈梭形、三角形,部分细胞胞体变圆,突起变短;10μM Aβ42作用24 h后,Con+Aβ42组部分细胞胞体回缩,失去折光性,胞质内出现颗粒,突起变细;10μM Aβ42作用24 h后,RNAi+Aβ42组大部分胞体回缩聚集、呈近圆形或不规则形,失去折光性,胞质内出现颗粒,突起变短变细,部分细胞碎片。6.干扰CD147表达对Aβ42损伤SH-SY5Y细胞胞核形态的作用Hoechst33258染色显示,Con组细胞核大,呈椭圆状,染色均一;Con+Aβ42组大部分细胞核呈椭圆状,染色均一,部分固缩;RNAi组大部分细胞核呈椭圆状,染色均一,部分细胞核碎裂、固缩;相对于RNAi组,RNAi+Aβ42组固缩细胞核多于RNAi组。7.干扰CD147表达对Aβ42调节SH-SY5Y细胞凋亡相关蛋白的作用CD147的Western blot实验结果显示:与Con组(0.82±0.05)相比,RNAi组(0.23±0.02)、RNAi+Aβ42组(0.21±0.05)CD147明显减少(P<0.01),Con+Aβ42组(0.89±0.06)CD147无明显变化;RNAi组(0.23±0.02)与RNAi+Aβ42组(0.21±0.05)间无明显变化;与Con+Aβ42组(0.89±0.06)相比,RNAi+Aβ42组(0.21±0.05)CD147明显减少(P<0.01)。Bax的Western blot实验结果显示:与Con组(1.57±0.12)相比,RNAi组(1.97±0.34)、Con+Aβ42组(1.83±0.19)、RNAi+Aβ42组(2.32±0.20)Bax表达水平均增加,以RNAi+Aβ42组(2.32±0.20)最高(P<0.01);与RNAi组(1.97±0.34)相比,Con+Aβ42组(1.83±0.19)无明显变化,RNAi+Aβ42组(2.32±0.20)明显升高(P<0.01);与Con+Aβ42组(1.83±0.19)相比,RNAi+Aβ42组(2.32±0.20)明显升高(P<0.01)。Bcl-2的Western blot实验结果显示:与Con组(0.84±0.02)相比,RNAi组(0.66±0.02)、Con+Aβ42组(0.64±0.03)、RNAi+Aβ42组(0.33±0.02)Bcl-2表达水平均降低,以RNAi+Aβ42组(0.33±0.02)最低(P<0.01);与RNAi组(0.66±0.02)相比,Con+Aβ42组(0.64±0.03)无明显变化,RNAi+Aβ42组(0.33±0.02)明显降低(P<0.01);与Con+Aβ42组(0.64±0.03)相比,RNAi+Aβ42组(0.33±0.02)明显降低(P<0.01)。第三部分CD147参与双氢睾酮抗Aβ42损伤SH-SY5Y细胞的调节作用目的:以SH-SY5Y细胞为研究对象,通过感染LV-BSG-RNAi慢病毒干扰CD147蛋白表达,并预先给予DHT孵育后加入外源性Aβ42,检测细胞活力、形态、凋亡相关蛋白的表达变化,并观察细胞培养基上清中Aβ42的含量变化。探讨CD147在DHT抗Aβ42诱发细胞损伤中的作用。方法:1.干扰CD147表达对双氢睾酮抗Aβ42损伤SH-SY5Y细胞活力的作用实验选用融合度达60-70%的SH-SY5Y细胞,随机分为对照组(Con+Aβ42)、干扰组(RNAi+Aβ42)、对照+DHT组(Con+DHT+Aβ42)、干扰+DHT组(RNAi+DHT+Aβ42)。对照组加入阴性对照Con077慢病毒(1E+9 TU/ml),干扰组加入LV-BSG-RNAi慢病毒(8E+8 TU/ML)。感染3 d后,对照+DHT组、干扰+DHT组更换含100 n M DHT的无血清培养基,对照组、干扰组更换含等量DMSO的无血清培养基,作用6 h后各组均更换含10μM Aβ42无血清培养基作用24 h。酶标仪490 n M处检测细胞活力。2.Elisa检测干扰CD147表达对双氢睾酮调节SH-SY5Y细胞清除Aβ42的作用实验分组和给药方式同实验1。Elisa检测培养基中Aβ42的含量。3.光镜观察干扰CD147表达对双氢睾酮抗Aβ42损伤SH-SY5Y细胞形态的作用实验分组和给药方式同实验1。光镜观察SH-SY5Y细胞形态。4.荧光显微镜观察干扰CD147表达对双氢睾酮抗Aβ42损伤SH-SY5Y细胞胞核的作用实验分组和给药方式同实验1。荧光显微镜观察SH-SY5Y细胞胞核形态。5.Western blot检测干扰CD147表达对双氢睾酮抗Aβ42损伤SH-SY5Y细胞过程中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的作用实验分组和给药方式同实验1。Western blot检测干凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的水平。结果:1.干扰CD147表达对双氢睾酮抗Aβ42损伤SH-SY5Y细胞活力的作用MTS结果显示:与Con+Aβ42组(0.49±0.03)相比,RNAi+Aβ42组(0.34±0.02)明显降低(P<0.05),Con+DHT+Aβ42组(0.63±0.03)和RNAi+DHT+Aβ42组(0.56±0.03)有所增加(P<0.05);与RNAi+Aβ42组(0.34±0.02)相比,Con+DHT+Aβ42组(0.63±0.03)和RNAi+DHT+Aβ42组(0.56±0.03)明显升高(P<0.05);与Con+DHT+Aβ42组(0.63±0.03)相比,RNAi+DHT+Aβ42组(0.56±0.03)有所下降减少(P<0.05)。2.干扰CD147表达对双氢睾酮调节Aβ42清除的作用Elisa结果显示:与Con+Aβ42组(65.40±4.16)相比,RNAi+Aβ42组(89.48±3.40)明显增高(P<0.01),Con+DHT+Aβ42组(35.37±4.32)和RNAi+DHT+Aβ42组(53.13±2.34)明显降低(P<0.01);与RNAi+Aβ42组(89.48±3.40)相比,Con+DHT+Aβ42组(35.37±4.32)和RNAi+DHT+Aβ42组(53.13±2.34)明显降低(P<0.01);与Con+DHT+Aβ42组(35.37±4.32)相比,RNAi+DHT+Aβ42组(53.13±2.34)明显升高(P<0.01)。3.干扰CD147表达对双氢睾酮抗Aβ42损伤SH-SY5Y细胞形态的作用Con+Aβ42组部分细胞胞体回缩,失去折光性,胞质内出现颗粒,突起变细;RNAi+Aβ42组大部分胞体回缩聚集、呈近圆形或不规则形,失去折光性,胞质内出现颗粒,突起变细,部分细胞碎片;Con+DHT+Aβ42组细胞大部分呈梭形、三角形,部分细胞胞体变圆回缩;RNAi+DHT+Aβ42组大部分胞体回缩变小、呈近圆形或不规则形,突起变细。4.干扰CD147表达对双氢睾酮抗Aβ42损伤SH-SY5Y细胞胞核的作用Hoechst33258染色显示,Con+Aβ42组细胞核部分缩小,染色质断裂,RNAi组核凝集显著增多,荧光强度逐渐增加;相对于Con+Aβ42组,预处理DHT后Con+DHT+Aβ42组核聚集减少;相对于RNAi+Aβ42组,预处理DHT后RNAi+DHT+Aβ42说核聚集略有减少,但仍多于Con+DHT+Aβ42组(图4)。5.干扰CD147表达对双氢睾酮抗Aβ42损伤SH-SY5Y细胞过程中凋亡相关蛋白的作用CD147的Western blot实验结果显示:与Con+Aβ42组(1.21±0.13)相比,RNAi+Aβ42组(0.40±0.07)、RNAi+DHT+Aβ42组(0.40±0.03)CD147明显减少(P<0.01),Con+DHT+Aβ42组(1.68±0.05)CD147有所增加(P<0.05);RNAi+Aβ42组(0.40±0.07)与RNAi+DHT+Aβ42组(0.40±0.03)间无明显变化;与Con+DHT+Aβ42组相比,RNAi+DHT+Aβ42组CD147明显减少(P<0.01)。Bax的Western blot实验结果显示:与Con+Aβ42组(0.41±0.04)相比,RNAi+Aβ42组(0.48±0.03)Bax表达水平升高(P<0.05),Con+DHT+Aβ42组(0.26±0.02)和RNAi+DHT+Aβ42组(0.34±0.03)Bax表达水平均降低(P<0.05);与RNAi+Aβ42组(0.48±0.03)相比,RNAi+DHT+Aβ42组(0.34±0.03)Bax表达水平降低(P<0.05);与Con+DHT+Aβ42组(0.26±0.02)相比,RNAi+DHT+Aβ42组(0.34±0.03)明显升高(P<0.05)。Bcl-2的Western blot实验结果显示:与Con+Aβ42组(0.91±0.02)相比,RNAi+Aβ42组(0.63±0.05)和RNAi+DHT+Aβ42组(0.77±0.05)Bcl-2表达水平降低(P<0.01),Con+DHT+Aβ42组(1.08±0.12)表达水平均升高(P<0.01);与RNAi+Aβ42组(0.63±0.05)相比,RNAi+DHT+Aβ42组(0.77±0.05)Bcl-2表达水平升高(P<0.01);与Con+DHT+Aβ42组(1.08±0.12)相比,RNAi+DHT+Aβ42组(0.77±0.05)明显降低(P<0.01)。结论:1.双氢睾酮可以剂量依赖性引起SH-SY5Y细胞中CD147蛋白表达的增加,该作用可以部分被氟他胺所阻断。CD147基因DNA启动子区存在雄激素受体结合位点,说明双氢睾酮可能通过基因组途径促进SH-SY5Y细胞中CD147的表达。2.干扰CD147表达能够加剧Aβ42对SH-SY5Y细胞的毒性作用,进一步降低细胞活力、影响细胞形态、降低胞外Aβ42的清除、增加促凋亡蛋白Bax的表达、降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。提示CD147减少可能通过凋亡途径增加Aβ42作用下细胞的损伤。3.干扰CD147表达能够阻碍双氢睾酮抗Aβ42诱导SH-SY5Y细胞损伤,进一步降低细胞活力、影响细胞形态、降低胞外Aβ42的清除、增加促凋亡蛋白Bax的表达、降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。提示CD147减少可能通过凋亡途径阻碍双氢睾酮抗Aβ42诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用。