目的：⑴对住院患者输血前ABO血型系统以外的红细胞不规则抗体进行检测并鉴定，分析其抗体产生的原因及种类；研究妊娠史、输血史及年龄性别与抗体产生的相关性；通过鉴别抗体性质帮助临床选择配合的血液，保障科学安全用血提供技术支持。⑵对血清学正反定型不符或抗原凝集强度减弱的患者血样进行 ABO基因第6内含子和第7外显子测序，分析其特点及突变规律，探讨 ABO亚型基因表达的分子机制。　　方法：①收集2015年5月至2016年9月份在温州医科大学附属第二医院拟输（备）血患者57344例，采用微柱凝胶抗人球蛋白法对患者进行红细胞血型不规则抗体筛查，阳性者进行抗体鉴定和分类。② 收集ABO正反定型不符或抗原凝集强度减弱的患者14例，采用抗-A、抗-B血型定型试剂对患者血液进行正定型鉴定，采用标准 A、B、O细胞对患者血液进行反定型鉴定，采用抗-A1凝集素、抗-H单克隆抗体及吸收放散试验进行亚型鉴定。③利用人类ABO血型A、B、cisAB、B（A）亚型基因分型试剂盒，采用PCR-SSP技术扩增ABO基因第6内含子、第7外显子进行测序分析。　　结果：⑴57344例患者红细胞不规则抗体筛查阳性57例，阳性率0.1％。其中男患者检出29例、占50.9%（29/57）：有输血史14例，无输血史15例；女患者检出28例，占49.1%（28/57）：有妊娠史22例（年龄范围为28～80岁），占78.6%（22/28），无妊娠史6例（年龄范围为2～13岁），占21.4%（6/28）。特异性抗体种类显示，患者中不规则抗体Rh系统37例，占65%（37/57），其中抗-D3例、抗-E21例、抗-C5例、抗-e4例、抗-c4例；还有Lea系统4例、MNS系统2例、自身抗体4例、未明确抗体10例。⑵14例样本经血清学检测、抗-A1、抗-H及吸收放散等试验，结果表现型A25例， A2B7例，A31例，弱B1例。⑶14例标本经基因检测发现A205/0025例、A208/B1011例、A307/0021例、B(A)04/0023例、B(A)02/0023例、Bw11/0021例。⑷DNA测序显示：A205第7号外显子存在nt1009 A＞G突变，导致多肽链第337位的精氨酸（Arg）转变为甘氨酸（Gly）[R337G]；A208第7号外显子存在539 G＞C突变，导致多肽链第180位的精氨酸（Arg）转变为脯氨酸（Pro）[R180P]；A307第7外显子存在nt745 C＞T错义突变，导致多肽链第249位的精氨酸（Arg）转变为色氨酸（Trp）[R249W]；B（A）04第7外显子存在nt640 A＞G突变，导致多肽链第214位的甲硫氨酸（Met）转变为缬氨酸（Val）[M214V]；B(A)02第7外显子存在nt700 C＞G突变，导致多肽链第234位的脯氨酸（Pro）转变为丙氨酸（Ala）[P234A]；Bw11第7外显子存在nt695 T＞C突变，导致多肽链第232位氨基酸由亮氨酸（Leu）转变为脯氨酸（Pro）[L232P]。　　结论：①不规则抗体筛查结果发现Rh血型系统的抗体阳性率最高，其中以抗-E抗体为主，这些免疫抗体会严重影响输血治疗效果，因此做好不规则抗体筛查，明确抗体性质，选择相合的血液输注，对保证输血安全具有重要临床意义。同时分析总结患者红细胞不规则抗体分布特点，发现不同性别患者不规则抗体检出率与年龄、既往免疫史的关联性存在明显差异。②14例血样基因检测发现A亚型7例：A205占35.7%（5/14），该亚型可能是汉族人群A亚型的热点突变；A208的539 G＞C突变能导致A抗原的表达减弱，可以认为 R180P突变是引起α-1,3-N-乙酰半乳糖基转移酶活性降低的原因；A307等位基因在中国大陆首次发现，与中国台湾报道的A307基因相符。③14例血样基因检测发现B亚型7例：B(A)型在人群中发生频率极低，我们发现6例实属罕见；Bw亚型基因检测发现695 T＞C突变符合Bw11亚型特征，目前研究较少，至于突变对基因转录和蛋白质合成、功能的影响有待进一步的研究。