目的在导师团队以往中医药防治肝癌研究的基础上,选择若干在肝癌细胞恶性增殖时表达量上调的基因,综合采用RNA干扰等实验技术,探索研究这些基因在肝癌细胞恶性增殖中的作用,以期丰富肝癌发病和恶性增殖机制,及肝癌热毒证发生的部分机制。方法主要包括:肝癌细胞的培养、目的基因干扰质粒的制备、脂质体瞬时转染干扰质粒、沉默目的基因后细胞增殖能力的MTT法检测、沉默目的基因后RT-q PCR的检测基因表达量的变化、沉默目的基因后Western blot检测蛋白表达的变化、沉默目的基因后流式细胞技术对细胞周期和细胞凋亡的检测、相关方法学实验探讨和改进以及文献资料查阅等。结果(1)成功构建了10个目的基因的干扰质粒。(2)荧光对照显示质粒转染成功。(3)转染si RNA后72h,与正常组相比PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A基因沉默组细胞数量明显减少。(4)转染si RNA后72h,PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A各基因相对表达量与阴性相比均不同程度下调,且下调幅度较明显。(5)转染si RNA后72h,与对照组相比PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A各基因沉默组其相应蛋白表达量呈现不同程度下调。(6)转染si RNA后72h,流式细胞技术检测细胞周期的变化显示,与阴性质粒转染组相比,PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A各基因敲除组的G2期峰面积有不同程度增加趋势,但改变不明显。(7)转染si RNA后72h,流式细胞技术检测细胞凋亡的情况显示,与阴性质粒转染组相比,PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A基因敲除组凋亡细胞数量有一定程度增加,但改变不明显。结论PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A等与应激相关基因具有维持和促进SMMC-7721肝癌细胞恶性增殖的作用,且其作用应当主要不是直接或间接通过调节细胞周期、凋亡来实现的。在肝癌患者常见的复杂证候中,热毒/瘀毒证候是基本证候之一,突出表现在肝癌的恶性增殖和难治,临床对应的会采用清热解毒类中药治疗。因此,本研究结果提示,PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A等基因的过表达,与肝癌的热毒/瘀毒证候相关,是其发生的物质基础。