18F-FDG和18F-FLT细胞结合实验早期评价放疗对非小细胞肺癌A549细胞抑制作用的实验研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mixiaoya2008
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目的摸索18F-FDG和18F-FLT与人非小细胞肺癌细胞株A549结合实验的方法。通过18F-FDG和18F-FLT细胞结合实验、MTT实验和流式细胞仪测定细胞周期实验,早期评价放疗对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用。方法(1)在不同条件下测定人非小细胞肺癌细胞株A549摄取18F-FDG和18F-FLT的细胞结合率:细胞数量为5×104~5×106/每孔;反应时间20min~120min;18F-FDG和18F-FLT的放射性活度为1.85~29.6KBq;葡萄糖浓度为0~11.1mmol/L时。用γ测量仪测量细胞的CPM计数(B)及上清液的CPM计数(F)。计算18F-FDG和18F-FLT的细胞结合率(%)=[B/(B+F)]。(2)对非小细胞肺癌A549细胞进行单纯照射,改变不同的照射剂量(2、4、6、8Gy),计算照射后24h和48h18F-FDG和18F-FLT的细胞结合抑制率;(3)采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同照射剂量(2、4、6、8Gy)作用于A549细胞24h和48h后观察OD值并计算细胞生长抑制率。(4)通过流式细胞仪检测,不同照射剂量(2、4、6、8Gy)作用于A549细胞24h和48h后细胞周期的变化情况。结果(1)当18F-FDG和18F-FLT放射性活度分别为3.7KBq,反应时间为100min,细胞数量分别为5×104、1×105、5×105、1×106和5×106/每孔时,18F-FDG细胞结合率分别为(7.65±1.05)%、(13.83±1.02)%、(21.76±1.35)%、(39.83±0.81)%、(41.43±1.86)%,18F-FLT细胞结合率分别为(4.95±0.42)%、(6.64±1.36)%、(12.86±0.88)%、(18.76±0.70)%、(21.49±1.52)%;其中18F-FDG组1×106组与5×106组之间无明显统计学差异(P>0.05),余各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。18F-FLT组5×104组与1×105组之间无明显统计学差异(P>0.05),余各组之间有统计学差异(P<0.05)。当细胞数量为1×106,反应时间为20、40、60、80、100、120min时,18F-FDG和18F-FLT放射性活度分别为3.7KBq,18F-FDG细胞结合率分别为(15.16±1.27)%、(19.27±1.43)%、(26.71±1.35)%、(29.35±1.66)%、(39.83±0.81)%、(40.41±2.28)%,18F-FLT细胞结合率分别为(5.54±1.28)%、(9.36±1.25)%、(11.52±1.62)%、(14.12±2.75)%、(18.76±0.70)%、(20.52±1.89)%;18F-FDG组20min和40min、60min和80min、100min和120min之间比较无明显统计学意义(P>0.05),余各组之间比较有统计学差异(P<0.05);18F-FLT组40min和60min、100min和120min之间比较无明显统计学差异(P>0.05),余各组之间有统计学差异(P<0.05)。当细胞数量为1×106,反应时间为100min,放射性活度为1.85、3.7、7.4、14.8、29.6KBq时,18F-FDG细胞结合率分别为(35.61±3.14)%、(39.83±0.81)%、(37.35±3.44)%、(36.83±2.93)%、(38.12±3.25)%,18F-FLT细胞结合率分别为(16.72±1.96)%、(18.76±0.70)%、(17.62±1.34)%、(18.39±1.02)%、(17.56±2.13)%;18F-FDG和18F-FLT不同放射性活度的细胞结合率各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。当细胞数量为1×106,反应时间为100min,放射性活度为3.7KBq,葡萄糖浓度为0、2.78、5.55、11.1mmol/L,18F-FDG细胞结合率分别为(37.47±1.54)%、(7.39±2.05)%、(5.13±1.36)%、(3.38±1.69)%,18F-FLT细胞结合率分别为(17.51±1.35)%、(16.38±1.82)%、(16.42±2.03)%、(17.87±0.93)%。18F-FDG组细胞结合率随着葡萄糖浓度的增高而降低,差异有统计学意义(P<0.05)。18F-FLT各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。(2)18F-FDG细胞结合实验,A549细胞经不同剂量(2、4、6、8Gy)的X线作用后24h和48h18F-FDG的细胞结合抑制率分别为(1.28±1.04)%、(3.01±1.66)%、(3.27±1.83)%、(6.32±3.22)%和(3.93±2.17)%、(5.97±2.65)%、(9.46±2.03)%、(13.38±1.88)%;经照射24h后2Gy组与4Gy组,4Gy组和6Gy组之间细胞结合抑制率无显著统计学差异(P>0.05),余各组之间有统计学差异(P<0.05)。48h后2Gy组与4Gy组之间细胞结合抑制率无显著统计学差异(P>0.05),余各组之间有统计学差异(P<0.05)。18F-FLT细胞结合实验,A549细胞经不同剂量(2、4、6、8Gy)的X线作用后24h和48h18F-FLT细胞结合抑制率分别为(4.14±4.36)%、(12.53±3.35)%、(19.44±3.14)%、(28.29±6.03)%和(3.16±2.27)%、(8.42±4.59)%、(12.70±3.55)%、(15.54±2.11)%;经照射24h后各组间细胞结合抑制率有统计学差异(P<0.05),48h后6Gy组和8Gy组之间细胞结合抑制率无显著统计学差异(P>0.05),余各组之间有统计学差异(P<0.05)。(3)MTT实验,非小细胞肺癌A549细胞经不同剂量(2、4、6、8Gy)X线作用后24h和48h细胞生长抑制率分别为(12.95±0.92)%、(13.26±2.67)%、(17.02±1.32)%、(20.80±0.88)%和(17.72±1.64)%、(28.27±1.32)%、(32.52±0.95)%、(34.57±1.48)%,细胞生长抑制率随放射剂量的增加和作用时间的延长而增高;照射后24h,2Gy组与4Gy组之间细胞生长抑制率无统计学差异(P>0.05),余各组之间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);照射后48h,各组之间细胞生长抑制率差异有统计学意义(P<0.05)。(4)流式细胞仪检测细胞周期实验,非小细胞肺癌A549细胞经不同剂量(2、4、6、8Gy)X线作用后24h和48h,S期在整个细胞周期中所占的百分比分别是32.76%、31.28%、18.55%、11.48%、3.18%和12.29%、11.26%、11.03%、10.97%、10.19%。G2期在整个细胞周期中所占百分比分别为37.29%、42.19%、48.11%、65.59%、79.99%和37.85%、40.27%、44.01%、44.50%、55.04%。结论1、在一定条件下A549细胞18F-FDG和18F-FLT的结合率随细胞数量的增多和作用时间的延长而增高,与放射性活度无关;A549细胞与18F-FDG的结合率随葡萄糖浓度的增高而降低,18F-FLT的结合率与葡萄糖浓度无关。2、不同的剂量的X线作用非小细胞肺癌A549细胞24h和48h后18F-FDG和18F-FLT细胞结合抑制率均随着照射剂量的增加而增高,且结果与MTT法测定的细胞生长抑制率呈正相关。3、A549细胞在X线作用后24h和48h,细胞周期发生不同时相的阻滞,以G2/M期阻滞为主。18F-FLT的摄取与X线作用后A549细胞S期的比例关系密切。
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