虾青素对过氧化氢诱导的小梁网细胞氧化损伤的保护作用

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luping303
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目的:氧化应激在青光眼患者小梁网结构损伤和功能失调中起重要作用。虾青素作为一种天然的类胡萝卜素具有抗炎、抗癌、抗氧化的功能。本研究致力于探索虾青素对小梁网细胞氧化应激的保护作用及可能的机制。  方法:选取生长良好的HTM细胞,用DMEM低糖完全培养基均匀接种于6孔板或96孔板中,每日于倒置显微镜下观察。当细胞生长接近80%左右时,分别用不同浓度的过氧化氢(0.4mM-1.5mM)或虾青素(0.1μM-500μM)处理细胞,观察3h,6h,12h,24h细胞状态,并检测处理后24h时细胞活力,选取0.9mM过氧化氢和1μM虾青素作为本实验后续所用的浓度。当细胞生长接近80%左右时,用0.9mM过氧化氢内孵育1h。1h后,将虾青素加入含过氧化氢的细胞培养液中,虾青素的终浓度为1μM。在过氧化氢处理后24h,观察细胞形态,DAPI染色观察细胞核形态,用CCK-8试剂盒检测细胞活力,RT-PCR用于检测Caspase3(CASP3)、Bcl-2(BCL2)和Bax(BAX)三种与凋亡相关mRNA的表达量。DCFH-DA荧光探针用于检测小梁网细胞内ROS水平。SOD和MDA的表达量用比色法测定。悬浮芯片系统用于分析细胞培养液中炎症因子的含量。  结果:不同浓度虾青素处理24小时后发现,当虾青素浓度小于100μM时HTM细胞活力和细胞形态与对照组相比无显著改变;不同浓度过氧化氢处理24小时后发现,0.4mM和0.5mM过氧化氢组细胞活力和对照组相比无显著差异,当过氧化氢浓度≥0.6mM时,随着过氧化氢浓度升高,细胞活力逐渐下降,细胞形态异常。0.9mM过氧化氢内孵育1h后加入1μM虾青素继续孵育23h后发现,1)与过氧化氢组相比,虾青素处理可显著提高小梁网细胞的细胞活力(1.6倍,p<0.05)。2)、与过氧化氢组相比,虾青素处理组BCL2(3.31倍,P<0.01)的表达水平显著升高,而BAX(0.32倍,P<0.01)和CASP3(0.59倍,P<0.01)表达量显著降低。3)、虾青素可抑制过氧化氢损伤导致的小梁网细胞ROS(0.57倍,p=0.226)生成增多。与过氧化氢损伤组相比,虾青素处理组SOD(1.64倍,p<0.05)生成量显著增多,而MDA(0.62倍,p<0.05)生成量显著减少。4)、虾青素降低过氧化氢诱导的Th-17通路细胞因子表达增多(IL-17A,0.5倍,p<0.05; IL-17F,0.8倍,p<0.05;IL-21,0.67倍,p<0.05; IL-21,0.69倍,p=0.353; IL-23,0.16倍,p<0.01),而Th-1/Th-2通路细胞因子无显著降低。  结论:虾青素对过氧化氢诱导的小梁网细胞氧化损伤有一定的保护作用。虾青素可能是通过清除小梁网细胞内多余的氧自由基,增强细胞抗氧化能力,调控凋亡相关基因抑制细胞凋亡,降低细胞内炎症因子的水平等机制保护过氧化氢诱导的小梁网细胞氧化损伤。
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