基于LncRNA UCA1/miRNA185-5P通路探索扶正祛邪法抑制喉鳞状细胞癌模型的机制研究

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目的:探索体外实验中补中益气汤含药血清对人喉鳞状细胞癌细胞增殖情况的影响,测定细胞内Lnc RNA UCA1、mi RNA-185-5P表达值,初步阐述补中益气汤可能通过Lnc RNA UCA1/mi RNA-185-5P信号轴抑制LSCC细胞增殖和侵袭。方法:(1)制备补中益气汤不同浓度的含药血清:选择体重为150g±25g的SD大鼠作为实验动物,将其分为空白组、生理盐水组、低浓度组、中浓度组、高浓度组,灌胃剂量按体表面积系数,折算成大鼠用药量。将补中益气汤以1.05g/kg的浓度按梯度灌胃14天后取腹主动脉血。(2)实验细胞的传代与干预:将冻存的人喉鳞状细胞癌细胞FADU复苏后,根据细胞增值情况传代,传至第三代后种板,在细胞生长对数期给予补中益气汤含药血清,按照血清浓度将其分为五个组,分别为空白组、生理盐水组、5%补中益气汤含药血清浓度组、10%补中益气汤含药血清浓度组、20%补中益气汤含药血清浓度组。干预3天后提取RNA。(3)CCK8检测细胞活性及增值情况(4)q PCR检测细胞内两种目的基因表达(5)整理数据,统计分析,统计软件选用spss26.0,P值小于0.05为差异有显著性。结果:测定Lnc RNA UCA1可见各补中益气汤含药血清组的表达值较对照组均有所下降,各实验组同对照组比较有差异,且p<0.05,除此之外,20%补中益气汤含药血清组与5%补中益气汤含药血清组比较,p<0.05。但5%补中益气汤含药血清组与10%补中益气汤含药血清组Lnc RNA UCA1的表达不存在差异性,20%补中益气汤含药血清组与10%补中益气汤含药血清组之间也不存在差异性。测定mi RNA-185-5P可见经补中益气汤含药血清干预后,当血清浓度递增时,mi RNA-185-5P的表达也逐渐升高,存在浓度依赖性的特点。经单因素方差分析数据后,各补中益气汤实验组与对照组均存在差异,且3个不同浓度的干预组之间也存在差异,p<0.05。结论:补中益气汤含药血清可能是通过Lnc RNA UCA1/mi RNA-185-5P轴抑制喉鳞癌细胞的增值,其可能的机制为下调Lnc RNA UCA1的表达,同时提高mi RNA-185-5P的表达。
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